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上海研生生化試劑有限公司

免疫組化化染色步驟

時(shí)間:2015-8-10閱讀:366
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操作步驟

⑴、石蠟切片脫蠟至水。

⑵、 3%H 2 O2 室溫孵育 5-10 分鐘,以消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。

⑶、蒸餾水沖洗, PBS 浸泡 5 分鐘 x2 (如需抗原修復(fù),可在此步后進(jìn)行)。

⑷、 5-10% 正常山羊血清(PBS 稀釋)封閉,室溫孵育 10 分鐘,傾去血清,勿洗。滴加 一抗 工作液, 37 ℃ 孵育 1-2 小時(shí)或 4 ℃ 過(guò)夜。

⑸、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。

⑹、滴加適量 *標(biāo)記二抗 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。

⑺、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。

⑻、滴加適量的 辣根酶或堿性磷酸酶標(biāo)記的鏈霉卵白素 工作液, 37 ℃ 孵育 10-30 分鐘。

⑼、 PBS 沖洗, 5 分鐘 x3 次。抗原

⑽、顯色劑顯色 3-15 分鐘(DAB 或 NBT/BCIP)

⑾、自來(lái)水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明,封片。

化染色步驟

冰凍切片 4-8μm ,室溫放置 30 分鐘后,入 4 ℃丙酮固定 10分鐘,PBS洗,5分鐘x3,用過(guò)氧化氫孵育5-10分鐘,消除內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性。抗原

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