串聯(lián)親和純化屬于親和純化的一種（比較了幾種常用的親和純化技術(shù)的優(yōu)缺點(diǎn)和常見應(yīng)用領(lǐng)域）。zui常用的親和純化技術(shù)是免疫沉淀法，通過抗體-抗原的親和作用，“捕捉”到相互作用的蛋白。但是普通的免疫沉淀法由于抗體存在交叉反應(yīng)，而可能會(huì)導(dǎo)致很多的假陽(yáng)性結(jié)果，不利于分析復(fù)合體的功能組分。串聯(lián)親和純化方法借助于特殊設(shè)計(jì)的標(biāo)簽，通過兩步純化得到更純的復(fù)合體組分，能夠避免過多的“噪音”干擾。

    一般而言，一個(gè)用于蛋白純化和驗(yàn)證蛋白相互作用的理想標(biāo)簽應(yīng)該具有以下特征：①使結(jié)合基質(zhì)對(duì)低濃度目的蛋白的有高親和力；②使目的蛋白比非特異蛋白對(duì)親和物質(zhì)有更高的結(jié)合特異性；③使目的蛋白能而且特異性的洗脫；④使洗脫條件適合以保持蛋白相互作用和蛋白復(fù)合體結(jié)構(gòu)。很明顯，這些條件在一定程度上自相矛盾，但是在1999年，通過對(duì)FLAG、His、Strep、*蛋白A的兩個(gè)IgG結(jié)合結(jié)構(gòu)域（ProtA）、鈣調(diào)蛋白結(jié)合肽（CBP）、角質(zhì)素結(jié)合結(jié)構(gòu)域（CBD）等篩選，Rigaut等發(fā)現(xiàn)ProtA和CBP是zui符合上述條件的有效標(biāo)簽，它們能夠有效地回收目的蛋白，分別大約為80%和50%（Rigautetal. 1999）。其中CBP標(biāo)簽可以在溫和條件下有效篩選目的蛋白，并從親和柱上釋放出來，而ProtA卻只有在低pH變性條件下才能從基質(zhì)結(jié)合的IgG上釋放出來。根據(jù)這些標(biāo)簽的特性，研究人員開發(fā)了一種新的蛋白純化串連技術(shù)，命名為TAP———抗體TandemAfinityPurification（串聯(lián)親和純化）。他們?cè)赑rotA和CBP之間插入一個(gè)特異的 TEV蛋白酶識(shí)別位點(diǎn)，構(gòu)建成一個(gè)融合標(biāo)簽，命名為TAP標(biāo)簽，可以分別通過ProtA和CBP作兩步串聯(lián)親和純化。純化一個(gè)TAP標(biāo)簽融合的目的蛋白（X）一般包括以下4步：

1.的蛋白所在復(fù)合體通過標(biāo)簽上的ProtA結(jié)合到IgG珠子。

2.滌去掉大部分非特異蛋白之后，TEV酶切后將結(jié)合的目的蛋白復(fù)合體從IgG珠子洗脫下來。

3.在鈣離子存在的條件下，通過暴露出的CBP結(jié)構(gòu)域，洗脫組分中目的蛋白復(fù)合體結(jié)合到鈣調(diào)蛋白包被的珠子上。

4.洗滌之后，加入 EGTA螯合鈣離子，使目的蛋白復(fù)合體洗脫下來。

    這種串聯(lián)親和純化方法尤其適用于蛋白復(fù)合體純化和鑒定相互作用蛋白（Rigautetal.19）。使TAP融合蛋白在生理?xiàng)l件下處于自然表達(dá)水平，可以在事先不知道復(fù)合體組成、活性和功能的情況下，利用相對(duì)少量的細(xì)胞快速純化出蛋白復(fù)合體，然后結(jié)合質(zhì)譜技術(shù)，可以鑒定出與目的蛋白相互作用的未知蛋白。而且，純化出的蛋白復(fù)合體組分保留體內(nèi)活性，可以用于體外生物學(xué)功能實(shí)驗(yàn)。串聯(lián)親和純化技術(shù)和其他蛋白純化或蛋白-蛋白相互作用技術(shù)一樣有很多相似之處，但仍有其自身的優(yōu)勢(shì)：純化條件接近生理環(huán)境，可以獲得活性組分；背景污染低，比單獨(dú)用ProtA或者CBP作一步親和純化能得到更純的蛋白復(fù)合體組分（Coxetal.2002；Rigautetal.1900）。抗體