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豐壽(上海)生物科技有限公司

ELISA試劑盒的操縱步驟進(jìn)行測(cè)定

時(shí)間:2016-1-20閱讀:517
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   在不同的固相載體上按預(yù)定的ELISA試劑盒,然后比較結(jié)果。小試管還可以當(dāng)作比色杯,zui后直接放入分光光度計(jì)中比色。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用,包被在固相上的抗原純度大大進(jìn)步,因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕捉包被法,試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善,重復(fù)性亦佳。聚苯乙烯具有較強(qiáng)的吸附蛋白質(zhì)的機(jī)能,抗體或蛋白質(zhì)抗原吸附其上后仍留存原來的免疫學(xué)活性,加之它的價(jià)格低廉,所以被普遍采用。ELISA試劑盒蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結(jié)合的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用力??刂品磻?yīng)前提,使各孔讀數(shù)在吸光度0.8左右。所有單個(gè)讀數(shù)與全部讀數(shù)的均數(shù)之差,應(yīng)小于10%。例如,在檢測(cè)抗DNA抗體時(shí),需用DNA作為包被抗原,而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合。

    ELISA板的特點(diǎn)是可以同時(shí)進(jìn)行大量標(biāo)本的檢測(cè),并可在特制的比色計(jì)上迅速讀出結(jié)果。換言之,包被等于抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過程。在哪一種載體上陽性結(jié)果與陰性結(jié)果差別zui大,這種載體就是這一ELISA測(cè)定項(xiàng)目的zui合適的固相載體。ELISA試劑盒試驗(yàn)中,檢驗(yàn)同一樣本達(dá)20次以上時(shí),就會(huì)發(fā)現(xiàn)這組數(shù)據(jù)(指測(cè)定結(jié)果的吸光值)分布在均值兩側(cè),大部分集中在均值附近。如果以測(cè)定值為橫坐標(biāo),以出現(xiàn)的頻率為縱坐標(biāo)作圖,就可繪出一個(gè)呈鐘形的曲線圖。鐘頂處為均值,其他值以均值為中心對(duì)稱分布,這就是正態(tài)分布。

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