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上海酶聯(lián)生物研究所

ELISA樣本的搜集跟保存直接影響試驗成果

時間:2018-1-30閱讀:148
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ELISA(酶聯(lián)免疫試驗)以其靈敏度較高、特異性好的特點已廣泛用于科研試驗及臨床,越來越多科研單位挑選用ELISA試驗辦法完結(jié)研究課題。的試劑、好的儀器和正確的操作是確保ELISA試劑盒檢測成果牢靠的必要條件,但樣本的搜集及保存操作不當也會影響ELISA試驗成果。樣本的搜集跟保存聽上去形似很簡單,但不乏有許多科研工作者由于樣本的搜集跟保存沒做好而影響試驗成果。
 

下面針對樣本搜集及保存酶聯(lián)生物提幾點主張:
1.嚴峻溶血,以HRP為符號的ELISA測定中,殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色構(gòu)成假陽性;
2.混有紅細胞的血清易沉積或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈;如有細菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會發(fā)生假陽性反應(yīng):
3.標本凝結(jié)不全,有時為了爭取時間快速檢測,常在血液還未開端凝結(jié)時即強行離心別離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中能夠構(gòu)成肉眼可見的
纖維蛋白塊,易構(gòu)成假陽性成果;
4.采血試管洗刷不*、重復(fù)運用易穿插污染:塑料試管能吸附抗原物質(zhì),樣本久置在塑料管內(nèi)會使樣本內(nèi)抗原含量下降構(gòu)成假陰性。
 

血清標本宜在新鮮時檢測,嚴峻溶血標本禁用。一般說來,在5天內(nèi)測定的血清標本可放置于4℃,標本在冰箱中保存時間過長導(dǎo)致血清IgG聚合,使間接法的試劑本底加深。超越一周測定的需-20℃保存。凍住血清融解后,蛋白質(zhì)部分濃縮,散布不均,應(yīng)充沛混勻并防止發(fā)生氣泡?;鞚峄蛴谐练e的血清標本應(yīng)先離心或過濾,弄清后再檢測。重復(fù)凍融會使抗體效價下跌,所以測抗體的血清標本如需保存作屢次檢測,宜少數(shù)分裝冰存;運用一次性玻璃試管或真空管*;并運用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,可能與高濃度肝素具有強壯的負電荷能吸附酶符號物不易洗脫有關(guān);EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA體系中辣根過氧化物酶活性;血液標本采集后必須使其充沛凝結(jié)后再別離血清,或標本采集時用帶別離膠的*或于*中參加恰當?shù)拇倌齽?/p>

 

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