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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>技術(shù)文章>>ELISA試劑盒操作方法
酶聯(lián)生物ELISA試劑盒是一種敏感性高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)確診方法,因?yàn)槠湓噭┓€(wěn)定、易保存、操作簡(jiǎn)潔、成果判斷較客觀等因素,以及既適宜于大規(guī)模篩查實(shí)驗(yàn)又能夠用于少數(shù)標(biāo)本的檢測(cè),既能夠做定性實(shí)驗(yàn)也能夠做定量分析等長(zhǎng)處,已廣泛應(yīng)用于微生物學(xué)、寄生蟲學(xué)、腫瘤學(xué)和細(xì)胞因子等領(lǐng)域。
ELISA試劑盒操作方法:
1.于反響孔中,參加新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗刷,zui后一遍用DDW洗刷。
2.加底物液顯色:于各反響孔中參加暫時(shí)制造的TMB底物溶液0.1ml,37℃ 10~30分鐘。
3.于各反響孔中參加2M硫酸0.05ml
4.可于白色布景上,直接用肉眼調(diào)查成果:反響孔內(nèi)色彩越深,陽(yáng)性程度越強(qiáng),陰性反響為無色或極淺,根據(jù)所呈色彩的深淺,以“+"、“-"號(hào)表示。也可測(cè)OD值:在ELISA檢測(cè)儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值,若大于規(guī)則的陰性對(duì)照OD值的2.1倍,即為陽(yáng)性。
5.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反響孔中加0.1ml,4℃ 過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗刷緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡(jiǎn)稱洗刷,下同)。
6.加樣:加必定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反響孔中,置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗刷。(一起做空白孔,陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔)。
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