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當(dāng)前位置:上海酶聯(lián)生物研究所>>技術(shù)文章>>對(duì)于實(shí)驗(yàn)血清的制備我們了解多少
試驗(yàn)開(kāi)端前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫,試劑不能直接在37溶解;試劑或樣品制造時(shí),均需充沛混勻,混勻時(shí)盡量防止起泡。試驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過(guò)高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋?zhuān)允瓜♂尯蟮臉悠菲鹾显噭┖械臋z測(cè)規(guī)模,核算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1,抗血清的制備
① 所需的抗原量
一般1-10mg/mL。②免疫途徑抗原的打針辦法有皮下打針、肌肉打針、腹膜內(nèi)打針、靜脈打針和淋巴結(jié)打針等。其中以靜脈打針*為簡(jiǎn)略便利,不需要佐劑乳化,發(fā)生抗體的高峰值出現(xiàn)較早,一般在一周左右,打針后一周即可采血測(cè)試效價(jià)。免疫過(guò)程中應(yīng)注意:a.佐劑只能現(xiàn)配現(xiàn)用:b.采血時(shí)刻不宜拖得太長(zhǎng)。因?yàn)槊庖邥r(shí)刻越長(zhǎng),發(fā)生穿插反應(yīng)的抗體也越多。
③抗血清的別離 當(dāng)?shù)玫綕M(mǎn)足的效價(jià)時(shí),即可進(jìn)行取血。將收集到的血液成斜面放置在37℃、溫箱中2h。然后置于4℃冰箱過(guò)一夜。次日用滴管汲取抗血清,用離心法(2000-3000r/min,20min)去掉沉積。然后測(cè)定效價(jià)、判定純度。純度用紫外分光光度計(jì)或Folin氏比色法進(jìn)行測(cè)定??寡灞4嬗?25℃低溫處。
④抗血清的效價(jià)測(cè)定 測(cè)定的辦法一般有兩種,即試管沉積法和免疫雙擴(kuò)散法。關(guān)于免疫酶技能運(yùn)用的抗血清,有必要具有必定的效價(jià),試管沉積法應(yīng)不低于1:2,免疫雙擴(kuò)散法不低于1:2,且要求單價(jià)抗血清。
2,捕食者的收集和準(zhǔn)備
首要辦法有3個(gè):①將胃內(nèi)含物擠在質(zhì)量好的濾紙上,但蛋白質(zhì)易與纖維素結(jié)合,若保存過(guò)久則難以洗脫:②將待查看的捕食關(guān)閉在明膠膠囊內(nèi),并加枯燥劑,以使蟲(chóng)體與膠囊別離:③盡可能快地將收集到 的捕食者貯存于低溫下(如-40℃)。
3,試驗(yàn)血清的制備
按戊二醛簡(jiǎn)易法進(jìn)行。
前兩種辦法適于郵寄和長(zhǎng)途運(yùn)輸,后一種辦法能保存較長(zhǎng)的時(shí)刻。一切的辦法都需堅(jiān)持枯燥。對(duì)較大的捕食者,可將消化道別離,像蟻、蝸牛以及蜘蛛等小型動(dòng)物則整個(gè)蟲(chóng)體。
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