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當(dāng)前位置:上海研域儀器設(shè)備有限公司>>公司動(dòng)態(tài)>>如何做好ELISA試劑盒標(biāo)準(zhǔn)曲線
許多ELISA試劑盒檢測(cè)都涉及到標(biāo)準(zhǔn)曲線的問題,標(biāo)準(zhǔn)曲線做的好與壞會(huì)直接影響到實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,甚至是關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗,那么究竟如何繪制或制作標(biāo)準(zhǔn)曲線呢?
做標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品檢測(cè)時(shí)有幾個(gè)問題需要注意
1、樣品的濃度等指標(biāo)是根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出來的,所以首先要把做標(biāo)準(zhǔn)曲線看作是比做正式實(shí)驗(yàn)還要重要的一件事,否則后面的實(shí)驗(yàn)結(jié)果無從談起。
2、設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品的標(biāo)準(zhǔn)濃度范圍要有一個(gè)比較大的跨度,并且要能涵蓋你所要檢測(cè)實(shí)驗(yàn)樣品的濃度,即樣品的濃度要在標(biāo)準(zhǔn)曲線濃度范圍之內(nèi),包括上限和下限。而對(duì)于呈S型的標(biāo)準(zhǔn)曲線,盡量要使實(shí)驗(yàn)樣品的濃度在中間坡度zui陡段,即曲線幾乎成直線的范圍內(nèi)。
3、采用倍比稀釋法配制標(biāo)準(zhǔn)曲線中的標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度,這樣就能夠保證標(biāo)準(zhǔn)樣品的濃度不會(huì)出現(xiàn)較大的偏離。
4、檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)樣品時(shí),應(yīng)按濃度遞增順序進(jìn)行,以減少高濃度對(duì)低濃度的影響,提高準(zhǔn)確性。
5、標(biāo)準(zhǔn)曲線的樣品數(shù)一般為7個(gè)點(diǎn),但至少要保證有5個(gè)點(diǎn)。
6、做出的標(biāo)準(zhǔn)曲線相關(guān)系數(shù)因?qū)嶒?yàn)要求不同而有所變動(dòng),但一般來說,相關(guān)系數(shù)R至少要大于0.98,對(duì)于有些實(shí)驗(yàn),至少要0.99甚至是0.999.
·ELISA試劑盒評(píng)價(jià)的方法
1.發(fā)質(zhì)控物進(jìn)行調(diào)查,這是目前國(guó)內(nèi)外常見的形式,采用定期發(fā)放質(zhì)控物至各實(shí)驗(yàn)室,各實(shí)驗(yàn)室在規(guī)定的日期進(jìn)行檢驗(yàn),并將結(jié)果報(bào)至組織者(部、省臨檢中心)。組織者通過統(tǒng)計(jì)分析,再將評(píng)價(jià)結(jié)果寄回實(shí)驗(yàn)室,使其了解工作質(zhì)量,發(fā)現(xiàn)問題,提高質(zhì)量。其缺點(diǎn)為由于各實(shí)驗(yàn)室吃小灶或互相打修改結(jié)果而達(dá)不到真正評(píng)價(jià)作用。
2.現(xiàn)場(chǎng)調(diào)查,事先不通知,臨時(shí)派出人員到各實(shí)驗(yàn)室,規(guī)定采用常規(guī)方法,檢測(cè)一組標(biāo)本,進(jìn)行評(píng)價(jià)。這種方法可以解決實(shí)際問題,進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)指導(dǎo),組織者常因人力、物力的原因而不能經(jīng)常性進(jìn)行。
·ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)記錄
1.所有實(shí)驗(yàn)的原始資料均應(yīng)存檔;
2.所有的記錄均應(yīng)規(guī)范登記在冊(cè);
3.原始登記表應(yīng)記錄試劑來源、批號(hào);
4.質(zhì)控血清的來源及測(cè)定值并注明是否在控;
5.簽上實(shí)驗(yàn)者姓名及審核者姓名。
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