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當(dāng)前位置:江蘇晶美生物科技有限公司>>公司動態(tài)>>圖像分析基本原理及分析過程
免疫組化技術(shù)是當(dāng)今廣泛應(yīng)用的檢測組織切片內(nèi)特定蛋白的實驗手段。利用圖像分析軟件來判讀切片圖像上蛋白表達(dá)程度是隨著軟件技術(shù)的發(fā)展逐步應(yīng)用到免疫組化技術(shù)中的。
組織上的蛋白表達(dá)程度,在圖片上表現(xiàn)為免疫染色的深淺及面積大小。用肉眼只能定性地進(jìn)行判讀,zui多粗略地作一個主觀的分級評價。使用圖像分析軟件則可以對圖片染色的程度作一個定量的測量。這個測量結(jié)果與切片上的蛋白表達(dá)強(qiáng)度有理論上的線性相關(guān)性。所以能客觀定量地反映它。
在圖像分析的方法中,使用灰度來表示一個點的明暗程度,而圖片上一個點的明暗程度是與切片上免疫染色物的“光學(xué)密度(OD,Optical Density )"決定的,再往下追蹤一步,就是與組織切片上這個點的蛋白表達(dá)程度決定的。這有點類似于分光光度計的情形,比色皿里液體樣品的吸光度與液體中吸光成分的濃度相關(guān),符合朗伯-比爾定律。圖片上一個點的光密度則與該點上的蛋白表達(dá)程度正相關(guān)(近似為正比)。所以測量一個點的光密度值,就是在測量這個點上蛋白表達(dá)程度的一個相對的量值。
這并不是因為圖像分析軟件測量不了圖片的光密度,而是因為在熒光圖片的拍 攝過程中,*不能把切片的熒光強(qiáng)度正確地表現(xiàn)到圖片的光密度上。zui終的定量分析結(jié)果恐怕還不如鏡下目視的判斷結(jié)果準(zhǔn)確。
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