蛋白酶系列_中性蛋-白酶(NP)測試盒
測定方法:微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/48樣
注 意:正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義:
NP在一定的溫度和中性pH條件下,催化水解蛋白質(zhì)。由于其安全無毒、水解能力強、作用范圍廣等特點,中性-蛋白酶常用于食品、飼料、化妝品和營養(yǎng)保健品生產(chǎn)。
蛋白酶系列_中性蛋-白酶(NP)測試盒
測定原理:
中性條件下,NP催化酪蛋白水解產(chǎn)生酪-氨酸;在堿性條件下,酪-氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍;在680nm有特征吸收峰。
自備儀器和用品:
可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96孔板、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、1.5 mL EP管和蒸餾水。
試劑組成和配制:
試劑一:液體100mL×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。臨用前加4mL蒸餾水溶解。
試劑三:粉劑×1瓶,4℃避光保存。臨用前加入10mL試劑一,沸水浴中磁力攪拌溶解。(可在燒杯上蓋一層保鮮膜,注意觀察,避免水分全部蒸發(fā),一般加熱15-30分鐘,該試劑為過飽和試劑,充分混勻后仍出現(xiàn)顆粒物不溶物不影響使用)。
試劑四:粉劑×1瓶, 4℃保存。臨用前加20mL蒸餾水溶解。
試劑五:液體4mL×1瓶,4℃保存。
標準品:液體1mL×1支,0.25μmol/mL標準酪-氨酸溶液,4℃保存。
粗酶液提取:
1.組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL試劑一)冰浴勻漿,8000g,4℃離心10min,取上清,即粗酶液。
2.血清或培養(yǎng)液:直接測定。
3.細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(104個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);然后8000g,4℃,離心10min,取上清置于冰上待測。