氧化磷酸化系列_Ca++Mg++ ——ATP酶測(cè)試盒
測(cè)定方法：微量法
產(chǎn)品規(guī)格：100管/48樣
注 意：正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
Ca++ Mg++-ATP酶廣泛分布于植物、動(dòng)物、微生物和細(xì)胞中，可催化ATP水解生成ADP和無機(jī)磷。
氧化磷酸化系列_Ca++Mg++ ——ATP酶測(cè)試盒
測(cè)定原理：
根據(jù)Ca++ Mg++-ATP酶分解ATP生成ADP及無機(jī)磷，通過測(cè)定無機(jī)磷的量來確定ATP酶活性高低。
需自備的儀器及用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
提取液：液體100mL ×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入6mL蒸餾水充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：液體 2mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。用時(shí)加入3mL蒸餾水， 4℃保存。
試劑五：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時(shí)加入25mL蒸餾水，溶解后4℃保存一周。
試劑六：粉劑×1瓶, 4℃保存。用時(shí)加入25mL蒸餾水，溶解后4℃保存一周。
試劑七：液體25mL×1 瓶，室溫保存。
試劑八：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。
0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將試劑八 20倍稀釋，即取 0.1mL試劑八加1.9mL蒸餾水充分混勻。
定磷劑的配制：按H2O: 試劑五:試劑六:試劑七=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺。若無色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意：配試劑好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
樣品酶液的制備：
1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備：
細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。
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