人腎小管上皮細(xì)胞系  HK-2齊一生物科技（上海）有限公司是一家專業(yè)生產(chǎn)和銷售各種生化試劑,細(xì)胞株、原代細(xì)胞、菌種、醫(yī)藥中間體,標(biāo)準(zhǔn)品和對照品的大型化學(xué)科技公司.齊一生物科技（上海）有限公司：.Web:www.qiyibio。。ｃｏｍ

人腎小管上皮細(xì)胞系  HK-2細(xì)胞培養(yǎng)方法 
1、收到細(xì)胞，請查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快。
2、收到細(xì)胞，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運輸過程中的問題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時，請不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時左右，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數(shù)細(xì)胞會重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁，請用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺盼藍(lán)染色證實細(xì)胞活力正常請按懸浮細(xì)胞的方法處理
3. 收到細(xì)胞時如無異常情況 ，請在顯微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過80%匯合度時，請按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
4，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時之需。
5 、24小時后，細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁，就可以傳代了。（貼壁細(xì)胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細(xì)胞生長面為準(zhǔn)）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml  0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時間以具體細(xì)胞為準(zhǔn)，一般1-3分鐘，不超過5分鐘?？梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動瓶壁，見細(xì)胞脫落下來，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之*脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心，1000rpm/5min。棄上清，視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二，如細(xì)胞量多可一傳三，有些細(xì)胞不易傳得過稀，有些生長較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶，以具體細(xì)胞和經(jīng)驗為準(zhǔn)。（懸浮細(xì)胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。
6，貼壁細(xì)胞 ，懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無菌操作。換液時，換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液，37度    5%CO2 培養(yǎng)
7.  收到細(xì)胞后，請鏡下觀察細(xì)胞，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多，請離心收集細(xì)胞，接種到一個新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進(jìn)口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞，若細(xì)胞不多時 血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ，血清濃度還是在10％。
培養(yǎng)基參考
500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含：必需與非必需氨基酸、維他命、有機與無機成分、激素、生長因子與微量元素）、細(xì)胞生長添加劑、抗生素/抗菌素溶液或青霉素/鏈霉素（P/S）溶液、FBS，適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養(yǎng)箱中使用

一、細(xì)胞操作參考書
二、生長特性：貼壁    懸浮
三、細(xì)胞生長條件：
培養(yǎng)基                  90%              （GIBCO）
血清              10%  FBS（GIBCO）
溫度                       37℃
空氣條件      5% CO2，,95% AIR
生長代數(shù)    P4
凍存條件    培養(yǎng)基70%、血清20%、DMSO10%
四、組成：
組份    規(guī)格
細(xì)胞一瓶    T25
細(xì)胞培養(yǎng)與操作說明    1份
五、細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項
1.如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，，而收到時呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請將懸浮的細(xì)胞即時離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基，培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒有出現(xiàn)增殖而是繼續(xù)脫落死亡，請及時實驗室，技術(shù)人員會跟進(jìn)解決
2.貼壁細(xì)胞生長緩慢：適當(dāng)提高血清濃度（zui高不能超過20%），或可根據(jù)該細(xì)胞生長密度，考慮胰酶消化后，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)
3.生長不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重懸打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)

六、細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請嚴(yán)格遵照無菌操作）
1．吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml  0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時間，通?？刂圃?-2min）
2．鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動時（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢让福?~8ml *培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散
3．取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)
4．注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項操作或者凍存
特別注意：（如使用公共實驗室或初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)）
1.收到細(xì)胞后請盡快更換為含15%血清的新鮮培養(yǎng)基，如因特殊情況需要繼續(xù)使用原瓶培養(yǎng)基，請在原瓶培養(yǎng)基中額外添加10%的血清（原瓶培養(yǎng)基的繼續(xù)使用時間zui長不宜超過72小時）
2.貼壁細(xì)胞收到當(dāng)天切忌立刻消化，請將細(xì)胞放置培養(yǎng)箱孵育過夜到第二天再做消化傳代
如簽收時出現(xiàn)培養(yǎng)瓶壁破裂，漏液等情況請及時做好照片記錄并實驗室
N-Acetyl-DL-alanine N-乙酰-DL-
N-Acetyl-L-alanine N-乙酰-L-
Acetylaniline 乙酰苯胺
4-Acetylbiphenyl 4-聯(lián)苯乙酮
Acetyl-L-carnitine hydrochlorid 乙酰L-肉堿鹽酸鹽
Acid green 25 酸性綠 25
Acid green 27 酸性綠 27
Acetylcholine bromide 溴化乙酰膽堿
Acetylcholine chloride 氯化乙酰膽堿
Acetylcholine chloride 氯化乙酰膽堿
Acetylcholine chloride 氯化乙酰膽堿
Acetylcholine iodide 碘化乙酰膽堿
N-Acetyl-L-cysteine N-乙酰-L-半胱氨酸
N-Acetyl-D-glucosamine N-乙酰-D-氨基葡萄糖
人腎小管上皮細(xì)胞系  HK-2N-Acetyl-D-glucosamine N-乙酰-D-氨基葡萄糖
N-Acetyl-L-glutamic acid 乙酰-L-谷氨酸
N-Acetylglycine N-乙酰甘氨酸
N-Acetyl-D-leucine N-乙?；?D-
N-Acetyl-L-leucine N-乙酰基-L-
Nα-Acetyl-L-lysine N-乙酰-L-賴氨酸
N-Acetyl-L-methionine N-乙酰-L-蛋氨酸
Acid blue 29 酸性蘭294
Acid blue 40 酸性蘭40
Acid blue 45 奧酸性蘭45
Acid chrome dark blue 酸性鉻深藍(lán)
N-Acetyl-L-phenylalanine N-乙酰-L-苯
N-Acetylphenylhydrazine N-乙酰苯肼
N-Acetyl-L-proline N-乙酰-L-脯氨酸
Acetylsalicylic acid 鄰乙酰水楊酸
Acetylsalicylic acid 鄰乙酰水楊酸
S-Acetylthiocholine iodide S-乙?；虼饣憠A
S-Acetylthioglycolic acid N-hydroxysuccinimide ester N-丁二酸,S-乙酰基巰基乙二醇酯
N-Acetyl-L-tryptophan N-乙酰-L-色氨酸
N-Acetyl-DL-tryptophan N-乙酰-DL-色氨酸
N-Acetyl-L-tyrosine N-乙酰-L-酪氨酸
N-Acetyl-DL-valine N-乙酰-DL-纈氨酸
Acid chrome blue K 酸性絡(luò)藍(lán)K
Acid Red 6B 酸性品紅6B
Acridine hydrochloride 吖啶鹽酸鹽水合物
Alizarin red 茜素紅
Alkaline transfer solution, 10x solution 溶液
Arsenazo III 偶氮砷III
Acridine orange, hemi salt 吖啶橙
Acridine orange hydrochloride , hydrate 吖啶鹽酸鹽
Acriflavine,neutral 吖啶黃素
Acriflavine hydrochloride 鹽酸吖啶黃
Acriflavine hydrochloride 鹽酸吖啶黃
Acrylamide 丙烯酰胺
Acrylamide 丙烯酰胺
Acrylamide 丙烯酰胺
Acrylamide 丙烯酰胺
Acrylamide 丙烯酰胺
Acryl/Bis 19:1, premixed powder 丙烯酰胺/甲叉雙丙烯酰胺(19:1)，干粉
Acryl/Bis 29:1, premixed powder 丙烯酰胺/甲叉雙丙烯酰胺(29:1)，干粉
Acryl/Bis 37.5:1, premixed powder 丙烯酰胺/甲叉雙丙烯酰胺(37.5:1)，干粉
ADA buffe 緩沖液
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