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所 在 地上海市
更新時(shí)間:2021-11-12 11:11:57瀏覽次數(shù):282次
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人B淋巴細(xì)胞急性白血病細(xì)胞 BALL-1細(xì)胞培養(yǎng)方法
1、收到細(xì)胞,請(qǐng)查看瓶子是否有破裂,培養(yǎng)基是否漏出,是否渾濁,如有請(qǐng)盡快。
2、收到細(xì)胞,如包裝完好,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀(guān)察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過(guò)程中的問(wèn)題,細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來(lái),顯微鏡下觀(guān)察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況,出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí),請(qǐng)不要打開(kāi)細(xì)胞培養(yǎng)瓶,應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右,讓細(xì)胞先穩(wěn)定下,再于顯微鏡下觀(guān)察,此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁,請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理
3. 收到細(xì)胞時(shí)如無(wú)異常情況 ,請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀(guān)察細(xì)胞密度,如為貼壁細(xì)胞,未超過(guò)80%匯合度時(shí),將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出,留下 5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng):超過(guò)80%匯合度時(shí),請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞,吸出培養(yǎng)液,1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘,吸出上清,管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。
4,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng),蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過(guò)的瓶子里,存放于4℃冰箱,以備不時(shí)之需。
5 、24小時(shí)后,細(xì)胞形態(tài)已恢復(fù)并貼滿(mǎn)瓶壁,就可以傳代了。(貼壁細(xì)胞)將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去,加3-5ml(以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn))PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的*消化,消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn),一般1-3分鐘,不超過(guò)5分鐘??梢苑湃?7℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁,見(jiàn)細(xì)胞脫落下來(lái),加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞,使之*脫落,然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心,1000rpm/5min。棄上清,視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù),一般一傳二,如細(xì)胞量多可一傳三,有些細(xì)胞不易傳得過(guò)稀,有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶,以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。(懸浮細(xì)胞)用移液管輕輕吹打瓶壁,直接將溶液吸入離心管離心即可。
6,貼壁細(xì)胞 ,懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無(wú)菌操作。換液時(shí),換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液,37度 5%CO2 培養(yǎng)
7. 收到細(xì)胞后,請(qǐng)鏡下觀(guān)察細(xì)胞,用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多,請(qǐng)離心收集細(xì)胞,接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液,使用新鮮配制的培養(yǎng)基,使用進(jìn)口胎牛血清. 剛接到細(xì)胞,若細(xì)胞不多時(shí) 血清濃度可以加到15%去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右 ,血清濃度還是在10%。
培養(yǎng)基參考
500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基(含:必需與非必需氨基酸、維他命、有機(jī)與無(wú)機(jī)成分、激素、生長(zhǎng)因子與微量元素)、細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、抗生素/抗菌素溶液或*/*(P/S)溶液、FBS,適合在飽和濕度為5%CO2與95%空氣的培養(yǎng)箱中使用
磷酸鹽緩沖液/Phosphate Buffer solution
碳酸鹽緩沖液/Carbonate Buffer solution
TRIS-HC1緩沖液/三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖液/TRIS-HC1 Buffer solution
醋酸鈉醋酸緩沖液/Sodium acetate -Acetic acid Buffer solution
*鈉鹽酸緩沖液/Barbitone sodium-Hydrochloric acid Buffer solution
硼砂鹽酸緩沖液/Borax-Hydrochloric acid Buffer solution
檸檬酸鈉鹽酸緩沖液/Sodium citrate-Hydrochloric acid Buffer solution
飽和苦味酸緩沖液/Saturated picric acid Buffer solution
Xmol/L鹽酸緩沖液/Xmol/L-Hydrochloric acid Buffer solution
Xmol/L硫酸緩沖液/Xmol/L-Sulphuric acid Buffer solution
Xmol/L草酸緩沖液/Xmol/L-Oxalate Buffer solution
Hank′s液/Hank′s solution
任氏液
盧戈液
三(2-羧乙基)膦鹽酸鹽/三(2-羰基乙基)磷鹽酸鹽/三(2-甲酰乙基)膦鹽酸鹽/三(2-羧乙基)磷鹽酸鹽/三(2-酰乙基)磷鹽酸鹽/TCEP
α-硫代甘油/3-巰基-1,2-丙二醇/1-硫代甘油/1-巰基甘油/1-硫甘油/1-硫代丙三醇/硫代丙三醇/硫代甘油/3-硫基-1,2-丙烷二醇/1-Thioglycerol
β-甘油磷酸二鈉五水物/β-*五水物/甘油2-磷酸二鈉鹽五水物/ 2-甘油磷酸二鈉鹽五水物/β-磷酸甘油酯二鈉鹽五水合物/Disodium beta-glycerol phosphate pentahydrate
β-甘油磷酸二鈉水合物/β-*水合物/甘油2-磷酸二鈉鹽水合物/2-甘油磷酸二鈉鹽水合物/β-磷酸甘油酯二鈉鹽水合物/BGP
α-甘油磷酸二鈉/α-*/DL-α-*/α-Glycerophosphate disodium salt hexahydrate
α-甘油磷酸鎂鹽/DL-α-甘油磷酸鎂鹽/甘油磷酸鎂/甘油磷酸酯鎂鹽/DL-α-Glycerol phosphate magnesium salt hydrate
礦物油/石蠟油/液體石蠟/白礦油/白油/白色礦物油/礦脂/凡士林油/白色油/白礦物油/礦油/Mineral oil/Paraffin oil
*/十八碳-9,12-二烯酸/(Z,Z)-9,12-十八烷二烯酸/順,順-9,12-十八碳二烯酸/亞麻油酸/十八碳-9,12,15-三烯酸/亞麻酸/Linoleic acid
油酸/順式-9-十八烯酸/十八碳-9-烯酸/紅油/十八烯酸/十八碳烯-9-酸/(Z)-9-十八烯酸/順-9-十八烯酸/順式十八烯-9-酸/Oleic acid
5-氟乳清酸/5-FOA
莽草酸/-(-)莽草酸/3,4,5-三羥基-1-環(huán)己烯-1-甲酸/3α,4α,5β-三羥基環(huán)已烯羧酸/蟒草酸/卡瓦根提取物/Shikimic acid
棕櫚油酸/順式-9-十六(碳)烯酸/9-十六碳烯酸/順-9-十六烯酸/軟脂油酸/順-9-十六碳烯酸/順-9-十六碳烯酸/Palmitoleic acid
反式-1,2-環(huán)己二胺四乙酸/反-1,2-環(huán)己二胺-N,N,N',N'-四乙酸/1,2-環(huán)己二胺四乙酸/反式-1,2-二氨基環(huán)己烷-N,N,N′,N′-四乙酸/反-1,2-二氨基環(huán)己基四乙酸單水合物/1,2-二氨基環(huán)己四乙酸一水化物/(1,2-環(huán)己基二腈)四乙酸鹽單水合物/DCTA/CyDTA
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