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蔗糖(sucrose)含量試劑盒說明書
For Research Use only
僅供研究用
貨號:QYS-234055
分光光度法 50 管/48 樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定測定意義:
蔗糖是植物光合作用的主要產(chǎn)物,也是糖分運輸和儲藏的主要形式。因此,測定蔗糖含量對于植物糖代謝具有重要意義。此外,蔗糖含量是飲料﹑蜂蜜、果脯﹑糖果和乳制品等產(chǎn)品質(zhì)量控制的重要指標之一。
測定原理:
先用堿與樣品共熱,破壞其中的還原糖。然后在酸性條件下將蔗糖水解生成葡萄糖和果糖,果糖進一步與反應,生成有色物質(zhì),在 480nm 下有特征吸收峰。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100ml×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 10mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 2.5ml×1 瓶,4℃保存;
試劑三:液體 40ml×1 瓶,4℃保存;
試劑四:液體 10ml×1 瓶,4℃保存;
試劑五:粉劑 0.5g×1 瓶,常溫保存。
蔗糖提?。?/span>
稱取 0.1~0.2g 樣本,常溫研碎,加入 1mL 提取液,適當研磨后快速轉(zhuǎn)移到離心管中,置于
80℃水浴鍋中 10min,振蕩 3~5 次,冷卻后,4000g,25℃離心 10min,取上清,加入 2mg試劑五,80℃脫色 30min,再加入 1mL 提取液,4000g,25℃離心 10min,取上清液測定。
測定操作表(在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑):
試劑(μL) | 空白管 | 標準管 |
| 測定管 |
樣本 |
|
|
| 100 |
試劑一 |
| 100 |
|
|
蒸餾水 | 100 |
|
|
|
試劑二 | 50 | 50 |
| 50 |
| 混勻,沸水浴煮沸 5min 左右(蓋緊,防止水分散失) |
| ||
試劑三 | 700 | 700 |
| 700 |
試劑四 | 200 | 200 |
| 200 |
混勻,沸水浴 30min,冷卻后 480nm 處蒸餾水調(diào)零,空白管、標準管和測定管分別記為 A1、 A2 和 A3。
蔗糖含量計算:
1、按照蛋白質(zhì)含量計算
蔗糖含量(mg/mg prot)=(C 標準管×V1×(A3-A1)÷(A2-A1) ÷(V1×Cpr)= (A3-A1)÷(A2-A1) ÷Cpr
此法需要自行測定樣本蛋白質(zhì)濃度建議選用本公司的 BCA 法蛋白含量測定試劑盒(貨號:QYS-237014)
2、按照樣品質(zhì)量計算
蔗糖含量(mg/g 鮮重)=(C 標準×V1)×(A3-A1)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2)=2×(A3-A1)÷(A2-A1)÷W。 C 標準管:標準管濃度,1mg/mL;V1:加入樣本體積,0.1mL;V2:加入提取液體積,2mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本鮮重,g。
注意:zui低檢測限為 100ng/g 鮮重或 1ng/mg prot
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