馬鈴薯Y病毒一步RT-PCR檢測試劑盒的研制

馬鈴薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)對馬鈴薯的危害zui大,可導(dǎo)致馬鈴薯退化,降低馬鈴薯產(chǎn)量。解決這一問題的重要途徑就是培養(yǎng)脫毒種薯,但是否*脫毒需要經(jīng)過檢測才能證實。本 研究依據(jù)PVY CP基因序列設(shè)計合成了一對引物PY1、PY2,以帶毒樣品植物總RNA為模板,在同一個反應(yīng)中同時加入反轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)所需試劑,反應(yīng)程序中包括反轉(zhuǎn) 錄和PCR反應(yīng)所需條件,進(jìn)行反應(yīng)擴(kuò)增,帶毒樣品擴(kuò)增得到340 bp的目的條帶,而健康對照無此目的條帶,從而建立了PVY的一步RT-PCR檢測技術(shù),并組裝成試劑盒。該試劑盒具有良好的穩(wěn)定性和特異性,靈敏度可以 檢測到帶毒植物組織下限的6.25μg,高于ELISA(100μg)和NASH(15μg)的靈敏度,雖然和常規(guī)方法的靈敏度相同,但更為快速、簡便、 易于操作,適合脫毒苗和脫毒種薯生產(chǎn)單位做大量樣品的檢測。