黃曲霉操作前打開紫外燈30-60分鐘，這個(gè)大家都知道。不過你別忘了還要在操作前至少10分鐘打開抽濾裝置來保證效果，但紫外消毒期間建議不要進(jìn)去一次特意打開抽濾裝置，可以與紫外燈一起打開，黃曲霉此時(shí)不需要抽濾開的過大就可以。（所謂的抽濾裝置就是就是那個(gè)風(fēng)機(jī)，就是吹風(fēng)超凈工作臺，不是過濾培養(yǎng)液的）!

細(xì)胞傳代培養(yǎng)（消化法）具體操作：

一：傳代前準(zhǔn)備；

1.預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。

2.用75％酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺和雙手。

3.正確擺放使用的器械：保證足夠的*作空間，不僅便于*作而且可減少污染。

4.點(diǎn)燃酒精燈：注意火焰不能太小。

5.準(zhǔn)備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶，放入微波爐內(nèi)高火，8分鐘再次消毒。

6.取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液：黃曲霉取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺內(nèi)。

7.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞：注意取出細(xì)胞時(shí)要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面，再在鏡下觀察細(xì)胞。

8.打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時(shí)要在酒精燈上燒口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液，用PBS清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細(xì)胞，*消化溫度是37℃。

2. 黃曲霉 顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時(shí)細(xì)胞消化適度。

3.吸棄消化液加入培養(yǎng)液：棄去胰蛋白酶液，注意更換吸管，加入新鮮的培養(yǎng)液。

三：吹打分散細(xì)胞；

1.吹打制懸：用滴管將已經(jīng)消化細(xì)胞吹打成細(xì)胞懸液。

2.吸細(xì)胞懸液入離心管：將細(xì)胞懸液吸入10ml離心管中。

3.平衡離心：平衡后將離心管放入臺式離心機(jī)中，以1000轉(zhuǎn)/分鐘離心6-8分鐘。

4.棄上清液，加入新培養(yǎng)液：棄去上清液，加入2ml培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。

四：分裝稀釋細(xì)胞；

1.分裝：將細(xì)胞懸液吸出分裝至2-3個(gè)培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。

2.顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量，必要是計(jì)數(shù)。注意密度過小會影響傳代細(xì)胞的生長，傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于5×105/ml。zui后要做好標(biāo)記。

五：繼續(xù)培養(yǎng)；

用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶，適當(dāng)旋松瓶蓋，放入CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。黃曲霉傳代細(xì)胞2小時(shí)后開始貼附在瓶壁上。當(dāng)生長細(xì)胞鋪展面積占培養(yǎng)瓶底面積25％時(shí)為一個(gè)＋，占50％為＋＋，占75％時(shí)為＋＋＋。  

XY1396    黃色短桿菌

XY1397    黃曲霉

XY1398    黃綠青霉

XY1399    黃綠綠僵菌

XY1400    黃桿菌屬

XY1401    環(huán)狀芽孢桿菌

XY1402    化學(xué)轉(zhuǎn)化小鼠鼻咽上皮細(xì)胞,TMNE細(xì)胞

XY1403    化膿性鏈球菌

XY1404    厚孢根霉

XY1405    猴腎細(xì)胞系 VERO E6細(xì)胞

XY1406    猴腎細(xì)胞系 MA-104細(xì)胞

XY1407    猴腎細(xì)胞系 BSC-1細(xì)胞

XY1408    猴腎細(xì)胞,Marc145細(xì)胞

XY1409    猴腎C M145細(xì)胞

XY1410    猴胚胎腎上皮細(xì)胞,marc-145-EGFP-puro細(xì)胞

XY1411    猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞,RF/6A細(xì)胞

XY1412    猴脈絡(luò)膜-視網(wǎng)膜(內(nèi)皮)細(xì)胞, RF/6A細(xì)胞

XY1413    猴的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,MSCS細(xì)胞

XY1414    喉表皮樣癌細(xì)胞,HEp-2細(xì)胞

XY1415    紅曲霉

XY1416    紅平紅球菌

XY1417    紅白細(xì)胞白血病細(xì)胞,HEL299細(xì)胞

XY1418    橫紋肌瘤細(xì)胞,A-673細(xì)胞

XY1419    恒河猴腎細(xì)胞,MA-104細(xì)胞

XY1420    恒河猴腎細(xì)胞,LLC-MK2細(xì)胞

XY1421    恒河猴腎細(xì)胞,LLC-MK2細(xì)胞

XY1422    恒河猴胚腎細(xì)胞,FRhK-4細(xì)胞

XY1423    恒河猴胚腎細(xì)胞,FRhK-4細(xì)胞

XY1424    黑色素瘤細(xì)胞,B16細(xì)胞

XY1425    黑曲霉

XY1426    褐鼠胰島素瘤上皮細(xì)胞,RIN-m細(xì)胞,

XY1427    褐球固氮菌

XY1428    和元菌種與細(xì)胞

XY1429    漢遜德巴利酵母

XY1430    海棗曲霉

XY1431    哈茨木霉

XY1432    果子貍腎上皮細(xì)胞,Hed68細(xì)胞