人胸腺激酶缺陷性細(xì)胞系操作前打開紫外燈30-60分鐘，這個(gè)大家都知道。不過你別忘了還要在操作前至少10分鐘打開抽濾裝置來保證效果，但紫外消毒期間建議不要進(jìn)去一次特意打開抽濾裝置，可以與紫外燈一起打開，人胸腺激酶缺陷性細(xì)胞系此時(shí)不需要抽濾開的過大就可以。（所謂的抽濾裝置就是就是那個(gè)風(fēng)機(jī)，就是吹風(fēng)超凈工作臺(tái)，不是過濾培養(yǎng)液的）!

細(xì)胞傳代培養(yǎng)（消化法）具體操作：

一：傳代前準(zhǔn)備；

1.預(yù)熱培養(yǎng)用液：把已經(jīng)配制好的裝有培養(yǎng)液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內(nèi)預(yù)熱。

2.用75％酒精擦拭經(jīng)過紫外線照射的超凈工作臺(tái)和雙手。

3.正確擺放使用的器械：保證足夠的*作空間，不僅便于*作而且可減少污染。

4.點(diǎn)燃酒精燈：注意火焰不能太小。

5.準(zhǔn)備好將要使用的消毒后的空培養(yǎng)瓶，放入微波爐內(nèi)高火，8分鐘再次消毒。

6.取出預(yù)熱好的培養(yǎng)用液：人胸腺激酶缺陷性細(xì)胞系取出已經(jīng)預(yù)熱好的培養(yǎng)用液，用酒精棉球擦拭好后方能放入超凈臺(tái)內(nèi)。

7.從培養(yǎng)箱內(nèi)取出細(xì)胞：注意取出細(xì)胞時(shí)要旋緊瓶蓋，用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺(tái)面，再在鏡下觀察細(xì)胞。

8.打開瓶口：將各瓶口一一打開，同時(shí)要在酒精燈上燒口消毒。

二：胰蛋白酶消化；

1.加入消化液：小心吸出舊培養(yǎng)液，用PBS清洗（沖洗），加入適量消化液（胰蛋白酶液），注意消化液的量以蓋住細(xì)胞，*消化溫度是37℃。

2. 人胸腺激酶缺陷性細(xì)胞系 顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察消化細(xì)胞，若胞質(zhì)回縮，細(xì)胞之間不再連接成片，表明此時(shí)細(xì)胞消化適度。

3.吸棄消化液加入培養(yǎng)液：棄去胰蛋白酶液，注意更換吸管，加入新鮮的培養(yǎng)液。

三：吹打分散細(xì)胞；

1.吹打制懸：用滴管將已經(jīng)消化細(xì)胞吹打成細(xì)胞懸液。

2.吸細(xì)胞懸液入離心管：將細(xì)胞懸液吸入10ml離心管中。

3.平衡離心：平衡后將離心管放入臺(tái)式離心機(jī)中，以1000轉(zhuǎn)/分鐘離心6-8分鐘。

4.棄上清液，加入新培養(yǎng)液：棄去上清液，加入2ml培養(yǎng)液，用滴管輕輕吹打細(xì)胞制成細(xì)胞懸液。

四：分裝稀釋細(xì)胞；

1.分裝：將細(xì)胞懸液吸出分裝至2-3個(gè)培養(yǎng)瓶中，加入適量培養(yǎng)基旋緊瓶蓋。

2.顯微鏡下觀察細(xì)胞：倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞量，必要是計(jì)數(shù)。注意密度過小會(huì)影響傳代細(xì)胞的生長(zhǎng)，傳代細(xì)胞的密度應(yīng)該不低于5×105/ml。zui后要做好標(biāo)記。

五：繼續(xù)培養(yǎng)；

用酒精棉球擦拭培養(yǎng)瓶，適當(dāng)旋松瓶蓋，放入CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。人胸腺激酶缺陷性細(xì)胞系傳代細(xì)胞2小時(shí)后開始貼附在瓶壁上。當(dāng)生長(zhǎng)細(xì)胞鋪展面積占培養(yǎng)瓶底面積25％時(shí)為一個(gè)＋，占50％為＋＋，占75％時(shí)為＋＋＋。  

XY1770    615小鼠乳腺癌瘤株 Ca759細(xì)胞

XY1771    615小鼠乳頭狀肺腺癌瘤株 P615細(xì)胞

XY1772    615小鼠前胃癌瘤株 Fc細(xì)胞

XY1773    615小鼠滑膜肉瘤瘤株 ZM755細(xì)胞

XY1774    615小鼠肺癌瘤株

XY1775    615小鼠T細(xì)胞性白血病瘤株 L7912細(xì)胞

XY1776    5-8轉(zhuǎn)基因鼻咽癌細(xì)胞系 F2-2細(xì)胞

XY1777    293T/17人胚腎細(xì)胞,293T/17細(xì)胞

XY1778    1肝細(xì)胞

XY1779    129小鼠ES細(xì)胞,E14細(xì)胞

XY1780    129小鼠ES細(xì)胞,D3細(xì)胞

XY1781    (舌鱗癌細(xì)胞,Tca-8113細(xì)胞

XY1782    (卵巢癌細(xì)胞,HO-8910細(xì)胞

XY1783    (急性粒細(xì)胞白血病細(xì)胞) HL-60?細(xì)胞

XY1784    (肝癌細(xì)胞,SK-HEP-1細(xì)胞

XY1785    (膀胱鱗癌細(xì)胞,SCaBER細(xì)胞

XY1786    ( 胚腎細(xì)胞,)? AAV-293細(xì)胞

XY1787     轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎細(xì)胞,COS-7(SV40細(xì)胞

XY1788     中國倉鼠卵巢細(xì)胞,CHO細(xì)胞

XY1789     乳腺管癌 T47-D細(xì)胞

XY1790     人正常皮膚細(xì)胞,Hacat細(xì)胞

XY1791     人胃腺癌細(xì)胞（低分化） Human BGC-823細(xì)胞

XY1792     人乳腺導(dǎo)管癌細(xì)胞,BT474細(xì)胞

XY1793     人前列腺正常細(xì)胞,rwpe2細(xì)胞

XY1794     人胚腎細(xì)胞,293 [HEK-293] 細(xì)胞

XY1795     人結(jié)腸癌細(xì)胞,HCT-8細(xì)胞

XY1796     人肝癌細(xì)胞,hep 3B細(xì)胞

XY1797     回盲腸腺癌 HCT-8細(xì)胞

XY1798     骨髓瘤細(xì)胞株 U266細(xì)胞

XY1799     肝轉(zhuǎn)移癌 HCCLMS細(xì)胞

XY1800     分泌A2抗體B淋巴細(xì)胞,BB7.2細(xì)胞

XY1801     低分化胃腺癌 BGC-823細(xì)胞

XY1802     大鼠腎細(xì)胞,NRK-52E細(xì)胞