兔軟骨寡聚基質(zhì)蛋白（COMP）定量檢測試劑盒（ELISA）
使用說明書
【試劑盒名稱】
兔軟骨寡聚基質(zhì)蛋白（COMP）定量檢測試劑盒（ELISA）
【試劑盒用途】
定量檢測兔血清、血漿及相關(guān)液體樣本中軟骨寡聚基質(zhì)蛋白（COMP）的含量。
【檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體一步夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）。將標(biāo)準(zhǔn)品、待測樣本和酶標(biāo)工作液加入到預(yù)先包被兔軟骨寡聚基質(zhì)蛋白（COMP）抗體的透明酶標(biāo)包被板中，溫育足夠時間后，洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入顯色劑A、B液，顯色劑（TMB）在辣根過氧化物酶（HRP）催化下轉(zhuǎn)化為藍(lán)色產(chǎn)物，在酸的作用下變成黃色，顏色的深淺與樣品中兔軟骨寡聚基質(zhì)蛋白（COMP）濃度呈正相關(guān)，450nm波長下測定OD值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的OD值，計算樣本中兔軟骨寡聚基質(zhì)蛋白（COMP）含量。
【試劑盒組成】
1 | 酶標(biāo)包被板 | 12孔×8條 | 7 | 顯色劑A液 | 6mL |
2 | 標(biāo)準(zhǔn)品：8μg/L | 0.6mL | 8 | 顯色劑B液 | 6mL |
3 | 20倍濃縮洗滌液 | 25mL | 9 | 終止液 | 6mL |
4 | 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 | 6mL | 10 | 說明書 | 1份 |
5 | 樣本稀釋液 | 6mL | 11 | 封板膜 | 2張 |
6 | 酶標(biāo)試劑 | 10mL | 12 | 密封袋 | 1個 |
備注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為：8、4、2、1、0.5、0.25 μg/L
【需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
- 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀
- 精密移液器及一次性吸頭
- 蒸餾水
- 一次性試管
- 吸水紙
【操作步驟】
1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加*40μL（即樣本稀釋5倍）；每孔再加入酶標(biāo)工作液100μL；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板）。
6、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。
7、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)（顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
8、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值（OD值）。
9、計算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值，計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實(shí)際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。
2、標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗。若不能立即試驗，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3、樣本應(yīng)充分離心，不得有溶血及顆粒。
【注意事項】
1、實(shí)驗嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，實(shí)驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。
2、酶標(biāo)包被板開封后如未用完，應(yīng)立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照都做雙份檢測，取平均值，以減小實(shí)驗誤差。
4、若顯色過淺，可適當(dāng)延長底物溫育時間。
5、為避免交叉污染，標(biāo)準(zhǔn)品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭；酶標(biāo)工作液、*和底物等公共組分，要懸臂加樣，不得碰到微孔；不得重復(fù)使用封板膜。
6、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用，不同批號的試劑不得混用。
7、底物B對光敏感，避免長時間暴露于光下。
【操作程序總結(jié)】
準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品
加入準(zhǔn)備好的樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和酶標(biāo)工作液，37℃反應(yīng)60分鐘
洗板5次，加入顯色液A、B，37℃顯色15分鐘
加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值
計算
【檢測范圍】
0.25-8μg/L
【規(guī)格】
96人份/盒
【貯藏】
2-8℃，避光防潮保存。
【有效期】
6個月
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