線粒體提取試劑盒說明書

【資料簡介】

α-MEM
α-MEM液體培養(yǎng)基，在使用的過程中要注意以下問題: 運輸中要避光冷藏，瓶口保持向上，切勿劇烈振蕩；開瓶后不要長時間暴露在空氣和強光下，以保持培養(yǎng)基的穩(wěn)定性；
α-MEM Hyclone SH30265.01B
品牌: HyClone
線粒體提取試劑盒說明書型號: SH30265.01B
Hyclone 原裝 500ML SH30265.01B
a-改良型MEM培養(yǎng)基，含L-*，核糖核苷及脫氧核糖核苷。SH30265.01b
液體培養(yǎng)基在使用的過程中要注意以下問題：
運輸中要避光冷藏，瓶口保持向上，切勿劇烈振蕩；
開瓶后不要長時間暴露在空氣和強光下，以保持培養(yǎng)基的穩(wěn)定

RPMI1640
說明：Gibco 31800-022含L-*和酚紅，不含HEPES和*。HyClone SH30809.01含 L-*，*和酚紅，不含硝酸鈣。
儲存條件：2-8℃

線粒體提取試劑盒
一，試劑盒組份
組份
Lysis Buffer
Mito-Wash Buffer
Store Buffer
二，說明
線粒體提取試劑盒用于從動物細胞或組織中分離出完整而純化的線粒體。適合于動物軟組織（肝或腦組織）和硬組織（肌肉）以及培養(yǎng)細胞的線粒體的制備。其制備物產(chǎn)量高，可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、代謝和蛋白組學等的研究。
三，線粒體提取試劑盒說明書操作步驟
1. 樣本處理
a. 組織勻漿：稱取100~200 mg新鮮組織如肝臟、腦、心肌等，PBS或生理鹽水沖洗，洗凈血水，濾紙吸干，用剪刀剪為碎塊放入小容量玻璃勻漿器內(nèi)。加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer，0℃冰浴上下研磨組織20次；
b. 培養(yǎng)細胞勻漿：消化細胞，PBS洗滌，800 × g 5~10 min離心收集細胞。計數(shù)。每次提取需要5 × 107個細胞，加入1.0 mL冰預冷的Lysis Buffer重懸細胞，將細胞懸液轉(zhuǎn)移到小容量玻璃勻漿器內(nèi)，0℃冰浴研磨30~40次；
2. 將組織或細胞勻漿物轉(zhuǎn)移到離心管，4℃，1000× g 離心5 min；
3. 取上清，加入一新的離心管中，4℃，1000× g 再次離心5 min。
4．取上清，加入一新的離心管中，4℃， 12,000 × g 離心10 min。離心后的上清含胞漿成分，可從中提取胞漿蛋白。將上清轉(zhuǎn)移到新離心管，線粒體沉淀在管底；
5. 在線粒體沉淀中加入0.5 mL  Wash Buffer重懸線粒體沉淀，4℃，1000× g 離心5 min；
6．取上清，加入一新的離心管中，4℃， 12,000 × g 離心10 min。棄上清，高純度的線粒體沉淀在管底；
6.用50 -100μL Store Buffer 或合適的反應緩沖液重懸線粒體沉淀，立即使用或-70℃保存。
四 注意事項：
1.為保證獲得完整的線粒體，*是全程低溫操作。第二是快速。第三，在不破壞亞細胞器的情況下破碎細胞是制備線粒體的zui關鍵環(huán)節(jié)。與組織塊相比，培養(yǎng)細胞特別是貼壁培養(yǎng)細胞在用玻璃勻漿器勻漿時較難破壁，因而要選用小容量玻璃勻漿器、間隙嚴密的研杵上下研磨培養(yǎng)細胞。
2.以離心力g計算正確的離心速度，不同的離心機可據(jù)此計算離心速度。
3.進行Western Blot和2D-膠電泳，可直接加入上樣緩沖液裂解線粒體。
五 線粒體提取試劑盒說明書儲存：四周內(nèi)使用可4℃儲存，*置-20℃
轉(zhuǎn)速與離心力換算
G＝1.11×(10-5)×R×[rpm]２
G為離心力，一般以ｇ（重力加速度）的倍數(shù)來表示；
[rpm] ２即：轉(zhuǎn)速的平方； R為半徑，單位為厘米。