大鼠半胱氨酸蛋白酶-3酶聯免疫分析

【資料簡介】

檢測范圍：                                                          96T

3 pmol/L -80 pmol/L

使用目的：

本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）含量。

大鼠半胱氨酸蛋白酶-3實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）水平。用純化的大鼠半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3），再與HRP標記的半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠半胱氨酸蛋白酶-3（caspase-3）濃度。 

試劑盒組成 

1	30倍濃縮洗滌液	20ml×1瓶	7	終止液	6ml×1瓶
2	酶標試劑	6ml×1瓶	8	標準品（160 pmol/L）	0.5ml×1瓶
3	酶標包被板	12孔×8條	9	標準品稀釋液	1.5ml×1瓶
4	樣品稀釋液	6ml×1瓶	10	說明書	1份
5	顯色劑A液	6ml×1瓶	11	封板膜	2張
6	顯色劑B液	6ml×1/瓶	12	密封袋	1個

標本要求 

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

大鼠半胱氨酸蛋白酶-3操作步驟

• 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

80 pmol/L	5號標準品	150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
40 pmol/L	4號標準品	150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
20 pmol/L	3號標準品	150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
10 pmol/L	2號標準品	150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
5 pmol/L	1號標準品	150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

• 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
• 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
• 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
• 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
• 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。 
• 溫育：操作同3。
• 洗滌：操作同5。
• 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
• 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
• 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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  選擇性價比高的“大鼠半胱氨酸蛋白酶-3”，應從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性、安全性及經濟性全面評價：
  1、靈敏度：有二層含義，1)為試劑檢出被檢物質的zui低量的能力；2)為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力;
  2、特異性：常用交叉反應率表示。含有與待測物相近結構部份的物質可能存在交叉反應，使測定結果升高，可能導致假陽性，所以交叉反應是評價其質量的關鍵指標;
  3、精密度：ELISA試劑一般指其批內CV%，其值應小于15%；定量試劑應同時考察線性范圍;
  4、準確度：通過添加回收實驗進行評價;