小鼠低氧誘導(dǎo)因子-1α,小鼠（HIF-1α）ELISA試劑盒說明書

【資料簡介】

小鼠低氧誘導(dǎo)因子-1α,小鼠（HIF-1α）ELISA試劑盒僅供研究使用 目的：本試劑盒用于測定小鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）的含量。
小鼠低氧誘導(dǎo)因子-1α,小鼠（HIF-1α）ELISA試劑盒實驗原理：
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中小鼠低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）水平。用純化的小鼠低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α），再與HRP標記的低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中小鼠低氧誘導(dǎo)因子-1α（HIF-1α）濃度。

小鼠低氧誘導(dǎo)因子-1α,小鼠（HIF-1α）ELISA試劑盒樣本處理及要求：
1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。
2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。
3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.
7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。