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犬細(xì)小病毒(CPV)定性檢測(cè)試劑盒(ELISA)說(shuō)明書(shū)
資料類(lèi)型 | doc文件 | 資料大小 | 449024 |
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關(guān) 鍵 詞 | 犬細(xì)小病毒,CPV,ELISA,試劑盒,試劑 |
- 【資料簡(jiǎn)介】
僅供科研使用,不得用于臨床檢驗(yàn)。
犬細(xì)小病毒(CPV)定性檢測(cè)試劑盒(ELISA)說(shuō)明書(shū)
【產(chǎn)品名稱(chēng)】
通用名稱(chēng):犬細(xì)小病毒(CPV)定性檢測(cè)試劑盒(ELISA)
英文名稱(chēng):Canine Parvovirus(CPV) ELISA KIT
【包裝規(guī)格】
96人份/盒
【預(yù)期用途】
僅供科研使用,定性檢測(cè)血清、血漿中犬細(xì)小病毒(CPV)。
【檢驗(yàn)原理】
試劑盒采用雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包被犬細(xì)小病毒(CPV)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、陰性和陽(yáng)性對(duì)照、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的犬細(xì)小病毒(CPV)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),判定陰陽(yáng)性。
【主要組成成分】
主要成分
組分
數(shù)量
主要成分
陰性對(duì)照
1.0 ml×1
陽(yáng)性對(duì)照
1.0 ml×1
包被微孔板
96T
預(yù)包被固相抗體
HRP標(biāo)記抗體
6mL
HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體
樣本稀釋液
6mL
底物液A
6mL
過(guò)氧化脲工作液
底物液B
6mL
TMB工作液
20×濃縮洗滌液
30mL
含0.15%Tween20的PBS
說(shuō)明書(shū)
1份
--
自封袋
1個(gè)
--
不干膠
2片
--
需要但未提供的材料及耗材
1、酶標(biāo)儀
2、精密移液器及一次性吸頭
3、蒸餾水
4、洗瓶或者自動(dòng)洗板機(jī)
5、37℃水浴鍋或恒溫箱
6、500ml量筒
7、無(wú)粉一次性乳膠手套
【儲(chǔ)存條件及有效期】
1、2-8℃保存,切勿冷凍,有效期6個(gè)月。
2、開(kāi)封使用后,包被微孔板放入帶有干燥劑的自封袋中,密閉自封袋,并將全部試劑放回2-8℃冰箱。
3、開(kāi)封后,按照建議的條件保存,校準(zhǔn)品、包被微孔板和HRP標(biāo)記抗體,有效期為14天,其他成分在標(biāo)簽標(biāo)明的有效期內(nèi)是穩(wěn)定的。
【適用儀器】
半自動(dòng)的酶標(biāo)儀,如Thermo MK3,或者國(guó)產(chǎn)酶標(biāo)儀。
【樣本要求】
樣本類(lèi)型和采集
以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過(guò)程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。
1、細(xì)胞培養(yǎng)上清:4000rpm條件下離心20min,去除細(xì)胞顆粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反復(fù)凍融。
2、血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,4000rpm條件下離心20min,小心地分離出血清,保存在- 20℃以下,避免反復(fù)凍融。
3、血漿:肝素,EDTA,或檸檬酸鈉作為抗凝劑。在4000rpm條件下,離心20分鐘取上清,血漿保存在-20℃以下,避免反復(fù)凍融。
樣本保存和穩(wěn)定性
樣本在2-8℃條件下,可以?xún)?chǔ)存72h,或者在- 20℃儲(chǔ)存6個(gè)月。樣本收集后,不是一次檢測(cè)完,請(qǐng)按一次用量分裝凍存,避免反復(fù)凍融,使用時(shí)在室溫下解凍,確保樣品均勻充分解凍。
【檢驗(yàn)方法】
試劑準(zhǔn)備
1、使用前,所有的組分都要至少?gòu)?fù)溫30min,確保充分復(fù)溫到室溫。
2、濃縮洗滌液:從冰箱取出的濃縮洗滌液,會(huì)有結(jié)晶產(chǎn)生,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解。濃縮洗滌液與蒸餾水,按1:20稀釋?zhuān)?份的濃縮洗滌液,添加19份的蒸餾水。
操作程序
- 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
- 設(shè)置陰性對(duì)照孔、陽(yáng)性對(duì)照孔和樣本孔,陰性、陽(yáng)新對(duì)照孔各加50μL對(duì)照品;
- 樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
- 除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
- 棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿(mǎn)洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
- 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
- 每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】
1. 陰性對(duì)照OD值:小于0.2。
2. 陽(yáng)性對(duì)照OD值:大于0.8。
3. 陽(yáng)性判斷(Cut-Off值):陰性對(duì)照OD值+0.25,樣本OD值大于閾值,判定為陽(yáng)性,反之,為陰性。
【試驗(yàn)方法的局限性】
該試驗(yàn)僅作為定性檢測(cè)犬血清、血漿中犬細(xì)小病毒(CPV),根據(jù)A值高低可作抗體水平強(qiáng)、中、弱的粗略評(píng)估。
【保存條件】
2℃-8℃保存,有效期6個(gè)月。
【注意事項(xiàng)】
生物安全
1、檢測(cè)必須符合實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范的規(guī)定,嚴(yán)格防止交叉污染,所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照傳染物進(jìn)行處置。
2、試劑盒的液體組分中,含有proclin-300防腐劑,可能引起皮膚過(guò)敏反應(yīng),避免吸入煙霧與皮膚接觸。
3、底物液對(duì)皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入煙霧。戴上防護(hù)手套,實(shí)驗(yàn)完成后*洗手。
技術(shù)提示
1、混合蛋白溶液時(shí),避免起泡。
2、加校準(zhǔn)品與樣本時(shí),每個(gè)校準(zhǔn)品濃度和樣本都要更換移液槍頭,公共組分應(yīng)該懸臂加樣,避免交叉污染。
3、合適的溫育時(shí)間,和充分的洗滌步驟,是保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性的必要條件。
4、底物溶液為無(wú)色液體,保存過(guò)程中變?yōu)樗{(lán)色,代表底物溶液已經(jīng)失效,不得使用。
5、終止液加樣順序與底物溶液加樣順序一致,加入終止液后,藍(lán)色底物產(chǎn)物,會(huì)瞬間變?yōu)辄S色。
6、實(shí)驗(yàn)中,用剩的板條,應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
7、所有液體組分,使用前充分搖勻,嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)標(biāo)明的時(shí)間、加樣量及加樣順序進(jìn)行溫育操作。
廢物處理
所有使用或未使用的試劑,所有污染性的一次性材料,應(yīng)當(dāng)遵循傳染性或潛在傳染性產(chǎn)品的處理程序,每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都有責(zé)任根據(jù)其實(shí)驗(yàn)的類(lèi)型和危險(xiǎn)性級(jí)別,進(jìn)行廢物和污物的處理,同時(shí)要嚴(yán)格依照有關(guān)規(guī)定對(duì)待所有的廢物和污物。
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