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飼料中鹽酸氨丙琳的測(cè)定液相色譜法

2012年04月09日 16:09:23人氣:1691來(lái)源:賽爾泰科技有限公司

 

飼料中鹽酸氨丙琳的測(cè)定液相色譜法
                                                           GB/T 8381.11-2005
范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了以液相色譜法測(cè)定飼料中鹽酸氨丙琳的方法,適用于配合飼料、濃縮飼料、添加劑預(yù)混合飼料和精料補(bǔ)充料中鹽酸氨丙琳的測(cè)定,zui低檢測(cè)濃度為1.0 m g/kg.
原理
飼料樣品中的鹽酸氨丙琳以含有離子對(duì)試劑的甲醇溶液超聲提取,離心后過(guò)濾,用離子對(duì)反相液相色譜法測(cè)定。
試荊和材料
除特殊注明外,本法所用的試劑均為分析純,水為蒸餾水,色譜用水符合GB/T 6682一級(jí)水的規(guī)定。
4.1 乙睛:色譜純。
4.2 甲醇。
4.3 十二烷基磺酸鈉。
4.4 二乙胺。
4.5 冰乙酸。
4.6 提取液:稱(chēng)取1. 36 g十二烷基磺酸鈉(4.3),溶于適量2+1(V1+V2)的甲醇水溶液中,并用該混合液稀釋至1 L.
4.7 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)品:純度99.8%.
4.8 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)溶液
4.8. 1 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液:準(zhǔn)確稱(chēng)取鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)品(4. 7)0.0500g,置于100mL容量瓶中,用提取液(4. 6)溶解并定容至刻度,搖勻,其濃度為500ug/mL,貯于4--6℃冰箱中,有效期一個(gè)月。
4.8.2 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)工作液:準(zhǔn)確吸取鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液(4.8.1)10.00 mL,置于50 mL容量瓶中,用提取液(4.6)溶解并定容至刻度,搖勻,其濃度為100 ug/mL。再以此稀釋液配置50 ug/mL,10 ug/mL,5 ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。
4.9 HPLC流動(dòng)相:稱(chēng)取1.09g 十二烷基磺酸鈉(4.3 ),溶于適量體積分?jǐn)?shù)為30%的乙睛水溶液中,加入3 mL二乙胺(4.4)10 mL冰乙酸(4.5),用體積分?jǐn)?shù)為30%的乙睛水溶液稀釋至I L混勻,用0.45mm濾膜過(guò)濾,使用前超聲脫氣。
5 儀器
分析天平:感量為0.0001g 0.001g ,各一臺(tái)。
超聲水浴。
離心機(jī):4000r/min-5000r/min,
GE-200液相色譜儀具有GE-200紫外檢測(cè)器或二極管陣列檢測(cè)器。:
6 試樣制備
GB/T 14699.1采取有代表性的樣品200g -500g ,用四分法縮至100g ,粉碎,使全部通過(guò)0.45mm孔徑的篩,充分混勻,貯于磨口瓶中備用。
分析步驟
7.1 提取
稱(chēng)取飼料樣品5g(準(zhǔn)確至0.0 01g ),置于50m L離心管中,準(zhǔn)確加人提取液(4.6)50.00m L,加塞,充分搖動(dòng)1min,再置超聲水浴中超聲提取20min,其間用手充分搖動(dòng)兩次。取出后于離心機(jī)上4000r/min離心10min,將上清液用0.45um濾膜過(guò)濾,濾液作為試樣溶液。
7.2 測(cè)定
7.2 .1 HPLC測(cè)定參數(shù)的設(shè)定
色譜柱:C18柱,柱長(zhǎng)150mm,柱內(nèi)徑4.6mm,粒度5um,Vertex C18分析柱。
柱溫 : 室溫。
檢測(cè)器 :紫外檢測(cè)器,檢測(cè)波長(zhǎng)267nm,
流動(dòng)相流速:1.5m L/min
進(jìn)樣量 : 10ul-20ul
7.2.2 f測(cè)定
7.1獲得的試樣溶液和相應(yīng)濃度的鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)工作液(4.8.2)進(jìn)行測(cè)定,以色譜峰峰
面積做單點(diǎn)校準(zhǔn)定量。
結(jié)果計(jì)算與表述
分析結(jié)果表示為鹽酸氨丙琳在飼料中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X,以毫克每千克(mg/kg)表示,用式(1)計(jì)算:X=P2*V1*c*V2/P1*m*V3……………………(1)
式中:
V1 加人提取液的體積,單位為毫升(mL) ;
V2 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)溶液的進(jìn)樣體積,單位為微升(uL);
V3 試樣溶液的進(jìn)樣體積,單位為微升(uL) ;
P1 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)的色譜峰面積響應(yīng)值;
P2 試樣溶液對(duì)應(yīng)的色譜峰面積響應(yīng)值;
c 鹽酸氨丙琳標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度,單位為微克每毫升(ug/mL);
m 試樣質(zhì)量,單位為克(g)。
平行測(cè)定結(jié)果用算術(shù)平均值表示,保留至小數(shù)點(diǎn)后1位。
9 重復(fù)性
在同一實(shí)驗(yàn)室,由同一操作人員使用同一臺(tái)儀器完成的兩個(gè)平行測(cè)定的相對(duì)偏差不大于7%
 
本標(biāo)準(zhǔn)是在查閱了大量國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)的基礎(chǔ)上,根據(jù)我國(guó)的技術(shù)發(fā)展水平研究制定的。
本標(biāo)準(zhǔn)由*提出。
本標(biāo)準(zhǔn)由全國(guó)飼料工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。
本標(biāo)準(zhǔn)起草單位:國(guó)家飼料質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心北京。
本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人:林東下、趙根龍、高生、李蘭、魏秀蓮、范理、蘇曉鷗、靳松。
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