皮張?zhí)烤页恋矸磻?yīng)操作技術(shù)

2011年05月23日 09:38:18人氣：1709來(lái)源：上海銳谷生物科技有限公司

①器械與藥品準(zhǔn)備

a．設(shè)備器材。大型高壓滅菌器，自動(dòng)揀皮器、半自動(dòng)揀皮器或手工揀皮器，反應(yīng)管木架與盤(pán)，20ml容量瓶與盤(pán)，過(guò)濾漏斗，各種量杯，各種容瓶，抗原與血清加注器，帶乳頭的毛細(xì)管，中性濾紙（中性石棉），大恒溫箱等。

b．藥品與反應(yīng)成分。

0．85％生理鹽水。

浸皮液：氯化銨0．85g（鹽皮不加氯化鈉）6。0—8．0。*0．3—0．5g，蒸餾水100ml，pH6.0-8.0

炭疽菌粉標(biāo)準(zhǔn)抗原、炭疽沉淀素血清、陰性血清，均由獸醫(yī)生物藥品廠供應(yīng)。

②檢樣

a．被檢皮張，應(yīng)存放在庫(kù)或的地方，須與檢疫合格的皮張分開(kāi)存放，嚴(yán)防污染。

b．每批被檢疫皮張按同產(chǎn)地、同種皮編成一個(gè)報(bào)檢號(hào)，每100張或50張為一捆，或碼成一垛，每批放在一處。

c．在每張皮的腿部或腋下邊緣部位，揀取樣皮一塊約1g，復(fù)檢時(shí)仍在*次揀樣的附近部位揀取樣皮一塊約20g，供作檢疫材料。

d．樣皮應(yīng)裝入特制的布袋內(nèi)（也可用其他容器），每袋應(yīng)制成100個(gè)小格，并編成1—100個(gè)袋號(hào)（稱百格袋），按其揀樣順序，將樣皮依次裝入小格袋內(nèi)，皮張?zhí)?、樣皮?hào)與袋格號(hào)應(yīng)一致，逐個(gè)將樣皮袋嚴(yán)密包裝送往消毒室。

e．皮垛的編號(hào)應(yīng)與裝樣皮的布袋號(hào)相一致。鹽皮、鮮皮及凍皮必須分開(kāi)揀樣，不得混摻。

f．檢樣完畢的皮張，在未收到檢疫結(jié)果通知單前，必須保持原狀，不得分類(lèi)、包裝、加工和移動(dòng)。

g．檢樣人員應(yīng)進(jìn)行炭疽預(yù)防免疫和具有一定防疫知識(shí)，在工作前應(yīng)穿好*，工作后，應(yīng)充分消毒洗手，工作服須高壓滅菌，要嚴(yán)格遵守防疫衛(wèi)生制度。

h．每次檢樣時(shí)，獸醫(yī)檢疫人員應(yīng)在現(xiàn)場(chǎng)負(fù)責(zé)指導(dǎo)監(jiān)督。

③消毒

a．收到樣皮后，應(yīng)按送檢單內(nèi)容進(jìn)行登記。

b．高壓滅菌器用前應(yīng)進(jìn)行檢查，然后將樣皮袋放人高壓滅菌器內(nèi)，使壓力升到103kPa （15lb）（121℃）保持30min。

c．干皮與濕皮應(yīng)分別消毒，‘如一次滅菌，干皮放上邊，濕皮放下邊，但濕皮、鮮皮和凍皮于滅菌前應(yīng)在37～38℃恒溫箱中放置48h，或放于室溫3～4天，令其干燥后再進(jìn)行滅菌。

d．在操作中，應(yīng)按檢驗(yàn)炭疽病的防疫要求，不得污染周?chē)h(huán)境和物品，用后的器械物品應(yīng)及時(shí)消毒處理。

④被檢皮張抗原的制備

a．將清潔干燥的容瓶放在木盤(pán)上，排成5列（或者10列），每列10只，每盤(pán)50瓶（或100瓶），經(jīng)滅菌后，修剪除去脂肪的樣皮，按規(guī)定的質(zhì)量，每2張裝入一個(gè)容瓶?jī)?nèi)，自左起第1排第l瓶放1—2號(hào)，第10瓶放19—20號(hào)，余類(lèi)推，第5排第50瓶放99—100號(hào)皮樣。容瓶位置不得混亂，第1瓶和第50瓶應(yīng)做記號(hào)。

b．如有缺皮或樣皮混亂時(shí)，須將相應(yīng)的容瓶翻扣起來(lái)，以免錯(cuò)號(hào)。

巳裝樣皮的木盤(pán)編號(hào)與樣皮袋號(hào)應(yīng)一致，同時(shí)將編號(hào)卡片放在木盤(pán)外側(cè)的號(hào)夾中，得遺失。

d．按l：10的比例將浸皮液*生理鹽水逐瓶加入20ml，在10～20~C的室溫條件下浸泡16～24h，也可在8～14~C水浴中浸泡14—20h。

e．以清潔無(wú)污染的容瓶與漏斗<每漏斗放以疊好的中性濾紙），每10個(gè)為l排，每盤(pán)5排計(jì)50個(gè)，其各個(gè)編號(hào)應(yīng)與樣皮木盤(pán)各個(gè)編號(hào)相一致。然后對(duì)號(hào)濾過(guò)，應(yīng)使皮張抗原濾到澄清透明為止。

f．將濾過(guò)透明之皮張抗原木盤(pán)編號(hào)卡片，放在木盤(pán)外側(cè)的號(hào)夾中，應(yīng)不得忘記和丟失。

⑤炭疽沉淀反應(yīng)操作方法

a．炭疽沉淀素血清應(yīng)為黃色透明，無(wú)溶血現(xiàn)象。振蕩渾濁的血清，濾過(guò)透明后，方能使用。凍過(guò)的血清應(yīng)不用。開(kāi)封后的血清，應(yīng)在1—3日內(nèi)用完。不同批號(hào)的血清不能混用。血清應(yīng)保存在2～14~C冷暗處，保存期為2年。

b．本反應(yīng)應(yīng)須在15—20~C以上的室溫下進(jìn)行。

巳實(shí)施本反應(yīng)前須按下列要求做好預(yù)備試驗(yàn)。

炭疽沉淀素血清，對(duì)1：5000倍標(biāo)準(zhǔn)炭疽菌粉抗原在lmin內(nèi)應(yīng)是標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性反應(yīng)。對(duì)已知陽(yáng)性皮張抗原經(jīng)15min應(yīng)呈陽(yáng)性反應(yīng)。

炭疽沉淀素血清對(duì)已知陰性皮張抗原和生理鹽水作用15rain應(yīng)呈陰性反應(yīng)。

陰性血清對(duì)1：5000倍標(biāo)準(zhǔn)炭疽菌粉抗原和已知陰性皮張抗原經(jīng)15min作用應(yīng)呈陰性反應(yīng)。

d．將反應(yīng)管按皮張抗原木盤(pán)內(nèi)的編號(hào)順序排好，以血清加注器（或帶乳頭毛細(xì)管）向

反應(yīng)管內(nèi)加注炭疽沉淀素血清o．1一o．2ml。然后以抗原加注器吸取等量的抗原，沿反應(yīng)管壁徐徐加入，并記錄加完后的時(shí)間，按加完的時(shí)間順序排好待判。

e．血清與皮張抗原的接觸面界限清晰，明顯可見(jiàn)，界限不清者應(yīng)重做。血清與抗原加注器（或毛細(xì)管）應(yīng)以生理鹽水充分*洗滌后方可繼續(xù)使用。

f．如為鹽皮抗原，應(yīng)在炭疽沉淀素血清中加入4％化學(xué)純氯化鈉后，方能做血清反應(yīng)。

⑥判定

a．判定時(shí)，左手取出木盤(pán)中的裝有10只反應(yīng)管的木條，然后將反應(yīng)管置于水槽中蘸水取出，放于眼睛平行位置，右手持黑色板襯于反應(yīng)管的后面，在光線充足處進(jìn)行觀察與判定。須按下列標(biāo)準(zhǔn)記錄結(jié)果。

b．“+”：抗原與血清接觸后，經(jīng)15min，在兩液接觸面處出現(xiàn)致密清晰、明顯的白環(huán)，為陰性反應(yīng)。

“土”：白環(huán)模糊、不明顯者，為疑似反應(yīng)。

“一”：兩液接觸面清晰無(wú)白環(huán)者，為陰性反應(yīng)。

“O”：兩液接觸面界限不清，或其他原因不能判定者，為無(wú)結(jié)果。

巳對(duì)可疑和無(wú)結(jié)果者，須重做1次。用過(guò)的一切用具，應(yīng)充分洗滌，使之清潔無(wú)污，干燥后再用。

⑦復(fù)檢

a．病皮復(fù)檢時(shí)，應(yīng)單張檢驗(yàn)。初檢呈陽(yáng)性和疑似的材料，須重新對(duì)同一浸泡瓶的兩個(gè)皮張?zhí)枓訌?fù)檢。復(fù)檢時(shí)應(yīng)使用2～3個(gè)血清效價(jià)與初檢血清效價(jià)相近的不同批號(hào)的沉淀素血清來(lái)進(jìn)行，同時(shí)用陽(yáng)性血清做對(duì)照。復(fù)檢的方法同初檢。

b．復(fù)檢材料呈陽(yáng)性反應(yīng)時(shí)，則判為炭疽沉淀反應(yīng)陽(yáng)性。復(fù)檢再呈疑似反應(yīng)時(shí)，須按陽(yáng)性皮張?zhí)幚怼?/div>

c．經(jīng)確定某號(hào)為陽(yáng)性病皮后，應(yīng)將病皮及上下相鄰之污染皮準(zhǔn)確地挑出，均作病皮處理，并蓋病皮戳印，保管于庫(kù)或地方隔離。病皮、污染皮未經(jīng)消毒，不得做合格皮處理。

d．皮張檢疫結(jié)束后，應(yīng)將結(jié)果填人檢疫簿中，并開(kāi)檢驗(yàn)結(jié)果通知單。

⑧以有效的方法對(duì)病皮進(jìn)行消毒，并經(jīng)效果鑒定合格者，方能加工投產(chǎn)應(yīng)用。

關(guān)鍵詞：高壓滅菌器恒溫箱

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