激情综合啪啪6月丁香,久久久久国产精品91福利,99精品日韩欧美在线观看,91成人午夜福利在线观看国产

技術(shù)中心

您現(xiàn)在的位置:環(huán)保在線 > 技術(shù)首頁 > 技術(shù)交流

間充質(zhì)干細(xì)胞的傳代培養(yǎng)

2011年05月17日 08:56:06人氣:1212來源:上海莼試生物技術(shù)有限公司

試劑和材料:
1. *培養(yǎng)基:α-MEM:α-*基礎(chǔ)培養(yǎng)基,含*,無核苷酸或脫氧核苷酸;添加:20%附加L-* 2mmol/L、經(jīng)FBS雜交瘤純化,非熱滅活、*100U/ml、*100μg/ml。過濾除菌。儲存于4℃,不超過2周;
2. PBSA;
3. */EDTA;
4. 聚丙烯離心管,15ml和50ml;
5. 塑料組織培養(yǎng)皿,直徑15cm;
6. 塑料微量移液器槍頭,10—1000μl;
7. 0.85%臺盼藍(lán)鹽溶液;
8. 微量移液器;
9. 改良的Neubauer*

實(shí)驗方法:
1. 在培養(yǎng)的MSCs細(xì)胞中小的、貼壁、紡錘形的成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞匯合至60%時,對其進(jìn)行處理。如果單層細(xì)胞稀疏,則進(jìn)行繼續(xù)潤洗和更換培養(yǎng)基;
2. 按如下步驟消化單層細(xì)胞;
(1) 用20ml預(yù)熱的PBSA潤洗單層細(xì)胞后,加入5ml*/EDTA;
(2) 將培養(yǎng)皿置于37℃ 2min,在10×放大倍數(shù)視野下觀察單層細(xì)胞。貼壁細(xì)胞應(yīng)正從塑料瓶上脫落;
(3) 將培養(yǎng)皿置于37℃ 2min,再次觀察。重復(fù)觀察直至90%的MSCs已從培養(yǎng)瓶中脫落下來;
(4) 加入5mlCCM,將10ml懸液移至15ml離心管中,500g離心10min;
(5) 離心完畢,棄去上清,每管用1—2ml預(yù)熱的PBSA重懸沉淀。如有必要,混合多管細(xì)胞懸液只進(jìn)行一次細(xì)胞計數(shù);
3. 取10μl細(xì)胞懸液加到10μl臺盼藍(lán)中,用*進(jìn)行計數(shù)。合適的細(xì)胞懸液濃度為(2—5)×105個細(xì)胞/ml,存活率需高于80%。*消化后用于傳代的早期培養(yǎng)物懸液,亦可進(jìn)行集落形成單位(CFU)測定、凍存或分化測定;
4. 將細(xì)胞以50—100個細(xì)胞/cm的密度接種到培養(yǎng)皿中,保持低密度以保證快速的自我更新和多潛能特性。用預(yù)熱CMM以7×103(zui終濃度為50個細(xì)胞/cm2)到1×104(zui終濃度為100個細(xì)胞/cm2)的密度重懸MSCs;
5. 預(yù)備適當(dāng)數(shù)量的15cm培養(yǎng)皿,加入25ml預(yù)熱的CMM;
6. 接種1ml步驟2和3所得的細(xì)胞懸液。來回滑動平皿(勿打圈)使細(xì)胞分布均勻。培養(yǎng)皿置于培養(yǎng)箱中,標(biāo)記為一代細(xì)胞;
7. 培養(yǎng)2—3天后,觀察并評價形態(tài)。MSCs應(yīng)為小的、紡錘體形狀,頻繁折光的雙聯(lián)體。此為培養(yǎng)良好的MSCs;
8. 從培養(yǎng)皿中吸出培養(yǎng)基,用20ml預(yù)熱的PBSA潤洗,加入25ml預(yù)熱的新鮮CMM;
9. 每次傳代時所需的培養(yǎng)皿數(shù)量取決于可以接種的細(xì)胞數(shù)量。方案中的上述體積適用于MSCs接種單個15cm培養(yǎng)皿。如有需要可按此例擴(kuò)大以接種多個培養(yǎng)皿;


 

關(guān)鍵詞:移液器 培養(yǎng)箱
全年征稿/資訊合作 聯(lián)系郵箱:hbzhan@vip.qq.com
版權(quán)與免責(zé)聲明
1、凡本網(wǎng)注明"來源:環(huán)保在線"的所有作品,版權(quán)均屬于環(huán)保在線,轉(zhuǎn)載請必須注明環(huán)保在線,http://www.hg1112.cn。違反者本網(wǎng)將追究相關(guān)法律責(zé)任。
2、企業(yè)發(fā)布的公司新聞、技術(shù)文章、資料下載等內(nèi)容,如涉及侵權(quán)、違規(guī)遭投訴的,一律由發(fā)布企業(yè)自行承擔(dān)責(zé)任,本網(wǎng)有權(quán)刪除內(nèi)容并追溯責(zé)任。
3、本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其它來源的作品,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)或證實(shí)其內(nèi)容的真實(shí)性,不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任。其他媒體、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,必須保留本網(wǎng)注明的作品來源,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
4、如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。

上海莼試生物技術(shù)有限公司作者

我要投稿
  • 投稿請發(fā)送郵件至:(郵件標(biāo)題請備注“投稿”)hbzhan@vip.qq.com
  • 聯(lián)系電話0571-87759680
環(huán)保行業(yè)“互聯(lián)網(wǎng)+”服務(wù)平臺
環(huán)保在線APP

功能豐富 實(shí)時交流

環(huán)保在線小程序

訂閱獲取更多服務(wù)

微信公眾號

關(guān)注我們

抖音

環(huán)保在線網(wǎng)

抖音號:hbzhan

打開抖音 搜索頁掃一掃

視頻號

環(huán)保在線

公眾號:環(huán)保在線

打開微信掃碼關(guān)注視頻號

快手

環(huán)保在線

快手ID:2537047074

打開快手 掃一掃關(guān)注
意見反饋
欧美三级韩国三级日本三斤-日本不卡一区不卡二区| 免费av一区在线观看-国产精品视频高潮流白浆视频免费| 国产免费一区二区三区不-日本少妇免费一区二区三区| 狠狠狠狠爱精品一二三四区-l舌熟女av国产精品| 日本亚洲精品中字幕日产2020-很黄很黄的裸交视频网站| 99热在线精品免费6-av一区二区在线观看| 国产欧美日本不卡精美视频-日本后入视频在线观看| 国产黄污网站在线观看-成人av电影中文字幕| 久久网站中文字幕精品-三级精品久久中文字幕| 天天干天天干2018-91人妻人人澡人爽精品| 免费av一区在线观看-国产精品视频高潮流白浆视频免费| 日韩精品人妻系列一区-亚洲女同性一区二区三区| 日本中文字幕啊啊啊啊-久久精品伊人久久精品伊人| 人妻互换精品一区二区-夜夜爽一区二区三区视频| 99久久精品一区二区成人-麻豆国产av玩弄放荡人妇系列| 在线视频成人一区二区-亚洲另类中文字幕在线| 国产美女网站在线观看-国产精品亚洲综合网69| 中文字幕日韩精品不卡一区二区-成人av在线观看一区二区| 免费看黄色污污的网站-欧美一区二区三区爽爽| 中文字幕日韩精品不卡在线一区-国产tv日韩在线观看视频| 亚洲午夜久久久精品影院-性感美女在线观看网站国产| 日韩中文字幕v亚洲中文字幕-日韩亚洲av免费在线观看| 国产高清av免费在线观看-黄片毛片大全一区二区三区| 亚洲欧洲一区二区福利-亚洲欧美日韩高清中文| 亚洲精品一区网站在线观看-黄页视频免费观看网站| 欧美字幕一区二区三区-好吊妞欧美一区二区在线观看| 久久网站中文字幕精品-三级精品久久中文字幕| 免费av一区在线观看-国产精品视频高潮流白浆视频免费| 亚洲女人黄色录像一区-日韩av电影在线免费看| 97人妻精品一区二区三区爱与-日韩精品亚洲专区在线观看| 亚洲福利视频免费观看-中文字幕日本不卡一区二区| 国产精品电影在线一区-亚洲国产大片一区二区官网| 深夜三级福利在线播放-日韩精品一区二区在线天天狠天| 人妻日韩精品中文字幕图片-麻豆极度性感诱人在线露脸| 国产欧美日本一区二区-一区二区三区亚洲在线播放| 久色高清精品在线国产-国产精品视频一区三区四区| 亚洲中文一二三av网-亚洲天堂成人免费在线| 白嫩美女娇喘呻吟高潮-久久一区二区三区日产精品| 中文字幕精品一区二区日本99-青青国产成人久久91网| 久艹在线观看视频免费-人妻偷人精品一区二区三区| 国产欧美日韩精品一区在线-久久精品视频免费获取地址|