廈門康研生物技術(shù)有限公司作者
人抗流行性出血熱(EHFAb)ELISA試劑盒說明書
本試劑盒僅供研究使用。
藥品名稱:
通用名:人抗流行性出血熱(EHFAb)酶聯(lián)免疫分析試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于定性測定人血清,血漿及相關(guān)液體樣本中抗流行性出血熱(EHFAb)。
實驗原理
本試劑盒采用間接法測定標本中人抗流行性出血熱(EHFAb)。用純化的流行性出血熱(EHF)抗原包被微孔板,制成固相抗原,與樣品中抗流行性出血熱(EHFAb)溫育后,加入*標記的抗IgG抗體,再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中人抗流行性出血熱(EHFAb)的存在與否。,
試劑盒組成
1 | 20倍濃縮洗滌液 | 50ml×1瓶 | 8 | 樣品稀釋液 | 6ml×1瓶 |
2 | 鏈霉親和素-HRP | 6ml×1瓶 | 9 | 陰性對照 | 0.5ml×1瓶 |
3 | 酶標包被板 | 12孔×8條 | 10 | 陽性對照 | 0.5ml×1瓶 |
4 | *標記的抗-IgG抗體 | 6ml×1瓶 | 11 | 密封袋 | 1個 |
5 | 顯色劑A液 | 6ml×1瓶 | 12 | 封板膜 | 3張 |
6 | 顯色劑B液 | 6ml×1/瓶 | 13 | 說明書 | 1份 |
7 | 終止液 | 6ml×1瓶 | | | |
標本要求
1.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
2.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
操作步驟
1. 編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔
2. 加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,37℃溫育45分鐘。
3. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
4. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)4次,拍干。
5. 加*標記的抗-IgG抗體:每孔加入*標記的抗-IgG抗體50μl。37℃溫育30分鐘
6. 洗滌:操作同4。
7. 加鏈霉親和素-HRP:每孔加入50μl的鏈酶親和素-HRP,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘。
8. 洗滌:操作同4。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A 50μl,再加入顯色劑B 50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
結(jié)果判定:
試驗有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為人抗流行性出血熱(EHFAb)陰性
陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為人抗流行性出血熱(EHFAb)陽性
注意事項
1.操作嚴格按照說明書進行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準,使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
規(guī)格:
96人份/盒
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月
廈門康研生物技術(shù)有限公司致力于各種生物試劑、抗體、ELISA試劑盒、細胞因子、耗材的銷售推廣及服務(wù)工作。
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關(guān)鍵詞:酶標儀
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