熒光定量PCR是指在傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，其熒光基團(tuán)會與PCR每次循環(huán)產(chǎn)生的新鏈的量成同比例增長，再利用檢測熒光信號的積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，zui后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
熒光定量PCR所使用的熒光化學(xué)可分為兩種：熒光探針和熒光染料。熒光探針如：TaqMan熒光探針，熒光染料如：SYBR熒光染料。
在熒光定量PCR檢測中經(jīng)常出現(xiàn)的一些定義值的含義：
Ct值：每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號到達(dá)設(shè)定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。
熒光域值：PCR反應(yīng)的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號，熒光域值的缺省設(shè)置是3-15個循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。
Ct值與起始模板的關(guān)系：每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中橫坐標(biāo)代表起始拷貝數(shù)的對數(shù)，縱坐標(biāo)代Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計算出該樣品的起始拷貝數(shù)。