上海通蔚生物科技有限公司作者
在微生物學(xué)、環(huán)境科學(xué)、分子生物學(xué)、毒理學(xué)、酶學(xué)、疫苗制備、藥品生產(chǎn)等等領(lǐng)域的實(shí)驗過程中,都需要應(yīng)用各種細(xì)菌,儲備標(biāo)準(zhǔn)菌種、參考菌種、特殊菌種是*的,下面就幾種實(shí)驗室菌株的保存方法簡述如下。
1 斜面低溫保存法
將分純的待存菌接種于適宜的固體斜面培養(yǎng)基上,得到充分生長后,用封口膜封口,貼上標(biāo)簽,保存于4℃的冰箱中。此法操作簡單、使用方便、不需要特殊設(shè)備,是實(shí)驗室菌種保存zui常用的方法。但保存時間短,一般每個月都要移種1次,而且菌種容易變異,所以此方法只適合實(shí)驗室短期實(shí)驗菌株的保存。
2 半固體瓊脂法
用接種針將以分純的待存菌,穿刺接種于半固體中,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)后取出,封上無菌的液體石蠟,貼上標(biāo)簽,放4℃冰箱保存。此方法簡便易操作,不需特殊設(shè)備、技術(shù)難度不大,但保存的時間不長,一般只能保存1年以內(nèi),而且對抵抗力弱以及一些特殊菌種大概只能存活3~6個月,需要頻繁的傳代,這樣很容易使菌株受到污染、變異。所以此方法不適用菌種的長期保存,只適合實(shí)驗室一些要求不高的菌種的短期保存。
3 液體石蠟保存法
將液體石蠟滅菌,放于37℃恒溫箱中,使水汽蒸發(fā)掉備用。再將已分純的待存菌在zui適宜的斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng),使得到健壯的菌體,用無菌吸管吸取已滅菌的液體石蠟,注入已長好的斜面培養(yǎng)基上,用量以高出斜面1cm為準(zhǔn),將試管直立,貼上標(biāo)簽,置4℃下保存。此法制作簡單,不需要特殊設(shè)備,菌種可以保存1年左右不需要經(jīng)常移種,缺點(diǎn)是保存的時候需要直立放置。此方法適合實(shí)驗室短期菌株的保存,而且保存時需要一定的空間[1]。
4 高層半固體瓊脂石蠟保存法
將待存菌經(jīng)平板劃線分離后,挑單個菌落用接種針反復(fù)穿刺接種到高層半固體瓊脂培養(yǎng)基中,經(jīng)培養(yǎng)箱培養(yǎng)后取出,用滅菌過的液體石蠟滴加到半固體瓊脂菌種管表層約0.5cm高度,貼上標(biāo)簽,存放4℃冰箱。此法操作簡便,不需要特殊設(shè)備,效果好,可以保存菌株1~2年。所以適合實(shí)驗室菌株的較長期的保存[2]。
5 紙片法
將已分純的待存菌用無菌鑷子鑷取紙片,在紙片上刮取4~5個菌落,放入凍存管內(nèi),蓋上蓋子后用封口膠布封住邊緣,貼上標(biāo)簽,放入冰箱冷凍保存(-20℃左右)。此方法具有操作簡單、不需特殊設(shè)備、經(jīng)濟(jì)實(shí)用、保存空間小等,而且保存時間至少2年,但對一些營養(yǎng)要求比較高的菌種,存活率不理想。所以此方法適合實(shí)驗室一些營養(yǎng)要求不高的菌種較長時間的保存[3]。
6 甘油液保存法
將已分純的待存菌接種于肉湯中,37℃培養(yǎng)18~24h,然后按5份肉湯溶液、2份甘油-生理鹽水保存液的比例分裝于滅菌的微量離心管或細(xì)胞凍存管中,貼上標(biāo)簽,置-80℃~-20℃冰箱保存。此法操作簡便,不需要特殊設(shè)備,效果好,可以保存菌種3年左右,無變異現(xiàn)象,而且此方法還可以保存一些要求較高的特殊菌種,適用范圍廣。所以此方法適合實(shí)驗室普通菌種或特殊菌種的較長期的保存[4]。
7 濕牛奶凍存法
將待存菌種于各自生長良好的平板培養(yǎng)基上,經(jīng)分純后放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)。用準(zhǔn)備好的保護(hù)劑牛奶洗下菌苔,再用無菌毛細(xì)滴管吸取菌懸液滴入菌種管球部,每管球部約有一半的菌液,之后火焰封口,貼上標(biāo)簽,保存于-20℃冰箱。此方法操作比較簡便,不需特殊設(shè)備、不需要花費(fèi)很多時間,而且保存時間大約3年,時間較長,不易變性,也不容易污染。所以此方法適合實(shí)驗室菌種較長時間的保存[3]。
8 蒸餾水保存法
取滅菌蒸餾水6~7ml加于已接待存菌斜面培養(yǎng)基的試管內(nèi),用吸管研磨,洗下斜面上的菌苔,充分混勻,將此菌液分裝于滅菌的螺旋小瓶中,或用膠塞密封,貼上標(biāo)簽,置于4℃保存。此法制作簡單,不需要特殊設(shè)備,且不需要經(jīng)常移種,而且可以保存數(shù)年,但要注意保存的時候需要直立放置。所以此方法適合實(shí)驗室菌種的長期保存[4]。
9 冷凍真空干燥法
將待存菌分純后,用準(zhǔn)備好的保護(hù)劑牛奶洗下菌苔,把菌懸液滴入菌種管后,在管口抽取少許棉花塞入管內(nèi)*處,放入冰箱-40℃速凍40min,放入準(zhǔn)備好的混有鹽的冰中,接上真空泵,真空抽干呈粉末狀,火焰封口,貼上標(biāo)簽,保存于-40℃冰箱。此法保存時間長,可達(dá)15年,不易變性,但需要儀器,一般實(shí)驗室難以配備,而且過程復(fù)雜,操作難度大,需要較長時間才能完成。所以此方法適合具有條件的實(shí)驗室菌種的長期保存[3]。
10 小結(jié)
綜上所述,我們在做實(shí)驗過程中或者短期保存菌種時,可以選擇斜面低溫保存法、半固體瓊脂法、液體石蠟保存法、高層半固體瓊脂石蠟保存法、紙片法,進(jìn)行保存;如果需要較長時間的保存菌株,可以選擇甘油液保存法、濕牛奶凍存法、蒸餾水保存法、冷凍真空干燥法保存菌株,其中冷凍真空干燥法需要實(shí)驗室配備好相應(yīng)的儀器設(shè)備。如果一些菌株營養(yǎng)要求比較高的話,可以選擇甘油液保存法、冷凍真空干燥法保存。當(dāng)然上述菌株保存的方法不是、zui方便的保存法,還需要我們不斷的探索,不斷的研究,找到一種或幾種簡單、方便、時間長的保存方法。
【參考文獻(xiàn)】
1 胡海林,郭維植.細(xì)菌實(shí)驗菌種的保存及管理.福建醫(yī)藥雜志,2000,22(1):113.
2 陳秀英.菌種保存方法的比較.中國衛(wèi)生檢驗雜志,2002,12(2):231.
3 葉迎春,趙世鴻,凌體淑. 3種菌種保存法比較. 中國誤診學(xué)雜志, 2004,4(3):386.
4 黃霞云.菌種保存方法的改進(jìn).廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報,1999,17(1):7.
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