揭開(kāi)低豐度蛋白的秘密

摘要： 生物樣品中高豐度蛋白的存在，掩蓋了更具研究意義的低豐度蛋白。比如，血清或血漿中的白蛋白或免疫球蛋白讓其它蛋白的檢測(cè)變得挑戰(zhàn)性。Bio-Rad公司的ProteoMiner protein enrichment kit能克服這種挑戰(zhàn)，幫你揭開(kāi)低豐度蛋白的秘密。 

生物樣品中高豐度蛋白的存在，掩蓋了更具研究意義的低豐度蛋白。比如，血清或血漿中的白蛋白或免疫球蛋白讓其它蛋白的檢測(cè)變得挑戰(zhàn)性。Bio-Rad公司的ProteoMiner protein enrichment kit能克服這種挑戰(zhàn)，幫你揭開(kāi)低豐度蛋白的秘密。ProteoMiner 低豐度蛋白富集系統(tǒng)是一種新型的樣品制備手段，它能極為有效地減少?gòu)?fù)雜生物樣品中蛋白濃度的動(dòng)態(tài)范圍。

ProteoMiner技術(shù)是如何富集低豐度蛋白的呢？下面這張圖可以形象地說(shuō)明。它是基于復(fù)雜樣品與高度多樣的六肽配基之間的相互作用。每個(gè)ProteoMiner珠子上都有不同的六肽配基，它們與某種蛋白具有特定的親和性。當(dāng)一個(gè)復(fù)雜的蛋白質(zhì)樣品與大量六肽配基共同孵育時(shí)，樣品中的蛋白質(zhì)會(huì)相應(yīng)地找到其結(jié)合位點(diǎn)而被珠子捕獲。由于珠子的結(jié)合能力有限，高豐度蛋白迅速飽和了相應(yīng)配基（紅色和黃色珠子），而多余的蛋白就被洗掉。與此相反，低豐度蛋白通過(guò)與特定配基（粉色和綠色珠子）的結(jié)合而富集。通過(guò)這種方式，低豐度蛋白質(zhì)相對(duì)得到了富集與濃縮。

 
ProteoMiner系統(tǒng)采用了組合的六肽文庫(kù)方法，而不是傳統(tǒng)的免疫去除方法，這就zui大限度地減少了對(duì)已知抗體的依賴，并防止某些與高豐度蛋白相結(jié)合的低豐度蛋白質(zhì)的去除。某些低豐度蛋白無(wú)法通過(guò)傳統(tǒng)方法檢測(cè)，也能借此有效富集和濃縮。ProteoMiner系統(tǒng)適合處理多種類型的樣品，比如血清、血漿、尿液、膽汁和血小板，與各種主流的下游蛋白分析技術(shù)兼容，包括1-D或2-D凝膠電泳，層析，SELDI及質(zhì)譜。

根據(jù)起始樣品蛋白量的不同，ProteoMiner 低豐度蛋白富集系統(tǒng)分別提供了小容量和大容量?jī)煞N試劑盒。小容量試劑盒適合處理有限的樣本材料，建議至少10 mg蛋白；大容量試劑盒則適合處理50 mg以上的蛋白。ProteoMiner系統(tǒng)采用離心柱形式，操作方便，且一次性的離心柱避免樣品的殘留污染。試劑盒中包含了富集低豐度蛋白過(guò)程中所需的所有必要試劑。小容量和大容量試劑盒分別可處理2個(gè)或10個(gè)樣本。

利用ProteoMiner protein enrichment kit富集低豐度血清蛋白。取等量的總蛋白進(jìn)行2-D電泳，從圖中可以看出，ProteoMiner珠子處理后凝膠的分辨率大大改善。高豐度蛋白大大減少，右圖中可看見(jiàn)更多的蛋白點(diǎn)。100 μg蛋白樣品在11 cm ReadyStrip pH 5–8 IPG膠條上等電聚焦，然后在Criterion 8–16% Tris-HCI預(yù)制膠中進(jìn)行第二向的電泳。