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分光光度計的使用方法指導(dǎo)

2013年09月10日 14:32:49人氣:1971來源:上海易蕭信息科技有限公司

  hbzhan內(nèi)容導(dǎo)讀:分光光度法是通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度,對該物質(zhì)進行定性和定量分析。常用的波長范圍為:(1)200~400nm的紫外光區(qū)(2)400~760nm的可見光區(qū),(3)2.5~25μm(按波數(shù)計為4000cm<-1>~400cm<-1>)的紅外光區(qū)。
  
  所用儀器為紫外分光光度計、可見光分光光度計(或比色計)、紅外分光光度計或原子吸收分光光度計。為保證測量的精密度和準(zhǔn)確度,所有儀器應(yīng)按照國家計量檢定規(guī)程或本附錄規(guī)定,定期進行校正檢定。
  
  分光光度計是精密光學(xué)儀器,正確安裝、使用和保養(yǎng)對保持儀器良好的性能和保證測試的準(zhǔn)確度有重要作用。
  
 ?。?)儀器工作環(huán)境的要求
  
  分光光度計對工作環(huán)境的要求如下:
  
 ?、賰x器應(yīng)安放在干燥的房間內(nèi),使用溫度為5~35℃.相對濕度不超過85%。
  
 ?、趦x器應(yīng)放置在堅固平穩(wěn)的工作臺上,且避免強烈的振動或持續(xù)的振動。
  
 ?、凼覂?nèi)照明不宜太強,且應(yīng)避免直射日光的照射。
  
 ?、茈娚炔灰酥苯酉騼x器吹風(fēng),以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
  
 ?、荼M量遠(yuǎn)離高強度的磁場、電場及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
  
 ?、薰┙o儀器的電源電壓為AC220V±22V,頻率為50Hz±1Hz,并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器,以加強儀器的抗干擾性能。
  
  ⑦避免在有硫化氫等腐蝕性氣體的場所使用。
  
  (2)儀器的日常維護和保養(yǎng)
  
 ?、俟庠础9庠吹膲勖邢?,為了延長光源使用壽命,在不使用儀器時不要開光源燈,應(yīng)盡量減少開關(guān)次數(shù)。在短時問的工作間隔內(nèi)可以不關(guān)燈。剛關(guān)閉的光源燈不能立即重新開啟。
  
  儀器連續(xù)使用時間不應(yīng)超過3h。若需長時間使用,間歇30min。
  
  如果光源燈亮度明顯減弱或不穩(wěn)定,應(yīng)及時更換新燈。更換后要調(diào)節(jié)好燈絲位置,不要用手直接接觸窗口或燈泡,避免油污沾附。若不小心接觸過,要用無水乙醇擦拭。
  
 ?、趩紊鳌紊魇莾x器的核心部分,裝在密封盒內(nèi),不能拆開。選擇波長應(yīng)平衡地轉(zhuǎn)動,不可用力過猛。為防止色散元件受潮生霉,必須定期更換單色器盒干燥劑(硅膠)。若發(fā)現(xiàn)干燥劑變色,應(yīng)立即更換。
  
  ③吸收池。必須正確使用吸收池,應(yīng)特別注意保護吸收池的兩個光學(xué)面。
  
  ④檢測器。光電轉(zhuǎn)換元件不能長時間曝光,且應(yīng)避免強光照射或受潮積塵。
  
  ⑤當(dāng)儀器停止工作時,必須切斷電源。
  
 ?、逓榱吮苊鈨x器積灰和沾污,在停止工作時,應(yīng)蓋上防塵罩。
  
 ?、邇x器若暫時不用要定期通電,每次不少于20~30min,以保持整機呈干燥狀態(tài),并且維持電子元器件的性能。
  
  紫外—可見分光光度計類型
  
  紫外一可見分光光度計按使用波長范圍可分為:可見分光光度計和紫外一可見分光光度汁兩類。前者使用的波長范圍為400~780nm;后者使用的波長范圍為200~1000nm。
  
  按光路紫外一可見分光光度計可分為單光束式及雙光束式兩類;按測量時提供的波長數(shù)又可分為單波長分光光度計和雙波長分光光度計兩類。
  
  所謂單光束是指從光源中發(fā)出的光,經(jīng)過單色器等一系列光學(xué)元件及吸收池后,zui后照在檢測器上時始終為一束光。常用的單光束紫外一可見分光光度計有751G型、752型、754
  
  型、756MC型等。常用的單光束可見分光光度計有721型、722型、723型、724型等。
  
  單光束分光光度計的特點是結(jié)構(gòu)簡單、價格低,主要適于作定量分析。其不足之處是測定結(jié)果受光源強度波動的影響較大,因而給定量分析結(jié)果帶來較大誤差。
  
  雙光束分光光度計是指從光源中發(fā)出的光經(jīng)過單色器后被一個旋轉(zhuǎn)的扇形反射鏡(即切光器)分為強度相等的兩束光,分別通過參比溶液和樣品溶液。利用另一個與前一個切光器同步的切光器,使兩束光在不同時間交替地照在同一個檢測器上,通過一個同步信號發(fā)生器對來自兩個光束的信號加以比較,并將兩信號的比值經(jīng)對數(shù)變換后轉(zhuǎn)換為相應(yīng)的吸光度值。
  
  常用的雙光束紫外一可見分光光度計有710型、730型、760MC型、760CRT型、日本島津UV一210型等。這類儀器的特點是:能連續(xù)改變波長,自動地比較樣品及參比溶液的透光強度,自動消除光源強度變化所引起的誤差。對于必須在較寬的波長范圍內(nèi)獲得復(fù)雜的吸收光譜曲線的分析,此類儀器極為合適。
  
  雙波長分光光度計與單波長分光光度計的主要區(qū)別在于采用雙單色器,以同時得到兩束波長不同的單色光。光源發(fā)出的光分成兩束,分別經(jīng)兩個可以自由轉(zhuǎn)動的光柵單色器,得到兩束具有不同波長A1和A2的單色光。借切光器,使兩束光以一定的時間問隔交替照射到裝有試液的吸收池上,由檢測器顯示出試液在波長λ1和λ2的透射比差值△r或吸光度差值△A,則
  
  △A=Aλ1-Aλ2=﹙Eλ1-Eλ2)bc
  
  由式可知,△A與吸光物質(zhì)c成正比。這就是雙波長分光光度進行定量分析的理論根據(jù)。
  
  常用的雙光束分光光度計有國產(chǎn)wFZ800S、日本島津UV一300、UV一365等。
  
  這類儀器的特點是:不用參比溶液,只用一個待測溶液,因此可以消除背景吸收干擾,包括待測溶液與參比溶液組成的不同及吸收液厚度的差異的影響,提高了測量的準(zhǔn)確度。它特別適合混合物和渾濁樣品的定量分析,可進行導(dǎo)數(shù)光譜分析等。其不足之處是價格昂貴。
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