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DNA的轉(zhuǎn)化實驗原理

時間:2013-12-31閱讀:373
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DNA的轉(zhuǎn)化實驗原理: 
    體外通過基因工程手段所構(gòu)建的含目的基因的重組質(zhì)粒,選用轉(zhuǎn)化和篩選技術(shù),可獲得含重組的陽性克隆.在此陽性克隆中,DNA可在生物體系中大量擴增,繁殖,保存以及表達目的基因的產(chǎn)物,這是PCR體外擴增DNA所不能替代的.配合DNA重組技術(shù),所獲得的,不同目的需要的陽性菌株已廣泛應用于科研,醫(yī)藥生產(chǎn)和生物發(fā)酵等領(lǐng)域. 
    質(zhì)粒轉(zhuǎn)化不同細菌有不同的轉(zhuǎn)化效率,轉(zhuǎn)化效率的高低與實驗的成敗直接相關(guān), 通常轉(zhuǎn)化效率可達105-107轉(zhuǎn)化子/μg DNA.獲得高轉(zhuǎn)化效率的關(guān)鍵是感受態(tài)體菌的制備.感受態(tài)就是細菌吸收轉(zhuǎn)化因子的生理狀態(tài),只有發(fā)展為感受態(tài)的細胞才能穩(wěn)定攝取外來的DNA分子. pUC18的LacZ基因區(qū)域當有DNA片段插入時,LacZ基因失活,轉(zhuǎn)化進入大腸桿菌并在含有IPTG和X-gal培養(yǎng)基生長時,會產(chǎn)生白色的克隆,不含插入片段的pUC18質(zhì)粒進入宿主細胞生成藍色菌落. 

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