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用什么方法進(jìn)行抗原修復(fù)?

時(shí)間:2013-11-13閱讀:737
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為什么要進(jìn)行抗原修復(fù)?

    組織在制作過(guò)程中,由于化學(xué)試劑的作用封閉了抗原,又由于熱的作用致使部分抗原的肽鏈發(fā)生扭曲,致使在免疫組化的染色過(guò)程中不能將其顯示出來(lái),為了解決上述的問(wèn)題,利用化學(xué)試劑和熱的作用將這些抗原重新暴露出來(lái)或修正過(guò)來(lái)的過(guò)程稱為抗原修復(fù)。

    在免疫組化染色后的鏡下觀察中,有發(fā)現(xiàn)這樣的結(jié)果,陽(yáng)性物反應(yīng)不強(qiáng),時(shí)隱時(shí)現(xiàn),表達(dá)不均勻,有時(shí)可出現(xiàn)假陰性,這是因?yàn)椋?/span>

1.組織在用甲醛固定的過(guò)程中所形成的醛鍵可封閉抗原的決定族。甲醛與組織蛋白質(zhì)類的反應(yīng)是多樣而復(fù)雜的,因?yàn)樗芎投喾N不同的功能基團(tuán)結(jié)合,在多數(shù)情況下在其間形成橋鍵8。這也是甲醛的一個(gè)作用,因?yàn)樗且环N聚合固定劑,因而能在相鄰的蛋白質(zhì)鍵間形成橋鍵的作用。

2. 甲醛在保存進(jìn)程中會(huì)形成羥甲基,也可封閉抗原決定族。據(jù)French和Edsall的研究認(rèn)為,zui常遇到的甲醇反應(yīng),就是加到一個(gè)含反應(yīng)性氫原子的化合物中,形成一個(gè)羥甲基化合物。

3.在組織固定過(guò)程中,甲醛與蛋白質(zhì)發(fā)生交聯(lián),形成醛交聯(lián)蛋白,這種化合物封閉了抗原,使之無(wú)法表達(dá)出來(lái)。

為了解決上述存在的問(wèn)題,更好地暴露出抗原,將其很好地顯示出來(lái),目前*的方法就是必須進(jìn)行抗原修復(fù)。

 用什么方法進(jìn)行抗原修復(fù)?

     至今為止,抗原修復(fù)有許多種方法,在這些方法中,有的是根據(jù)抗體的要求來(lái)進(jìn)行,有的是根據(jù)抗原的表達(dá)程度來(lái)進(jìn)行,我們則對(duì)每種病例每項(xiàng)檢測(cè),都要求必須進(jìn)行抗原修復(fù),以達(dá)到抗原全面表達(dá)的*狀態(tài)。

物理化學(xué)試劑抗原修復(fù)法:

1. 真空負(fù)壓抗原修復(fù)法:

① 切片脫蠟至水。

②0.3%H2O2甲醇真空負(fù)壓處理5分鐘。

③自來(lái)水洗,蒸餾水洗。

④0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH6.0),真空負(fù)壓干燥箱預(yù)先調(diào)至95℃,真空負(fù)壓處理10分鐘。

⑤待修復(fù)注降至室溫的一,PBS洗3次,隨后按選好的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。

2.微波輻射抗原修復(fù)法:

①切片脫蠟至水。

②0.3%H2O2甲醇處理10分鐘。

③自來(lái)水洗,蒸餾水洗。

④ 0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH6.0),于微波爐內(nèi)微波輻射10分鐘,如檢測(cè)Er和Pr則需要20輻射分鐘左右。

⑤待修復(fù)液降至室溫后,PBS洗3次,隨后按選好的免疫組織化學(xué)的染色方法進(jìn)行染色。

3.高壓抗原修復(fù)法:

①切片脫蠟至水。

②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。

③自來(lái)水洗,蒸餾水洗。

④切片放入抗原修復(fù)液中,邊同容器放入高壓鍋中加熱至沸騰。蓋上壓力閥至噴汽后持續(xù)1-4分鐘。

⑤待修復(fù)液恢復(fù)至室溫后,PBS洗3次,隨后按選好的免疫組織化學(xué)染色方法進(jìn)行染色。

4.隔水熱抗原修復(fù)法:

①切片脫蠟至水。

②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。

③自來(lái)水洗,蒸餾水洗。

④切片放入0.01M檸檬酸鹽緩沖液(PH0.6)中,邊同容器一起放入水溶鍋中加熱,其間應(yīng)不斷用溫度計(jì)測(cè)其溫度,待抗原修復(fù)液的溫度達(dá)到有效溫度后(92℃↑)。即開(kāi)始計(jì)時(shí),持續(xù)40分鐘。

⑤待抗原修復(fù)液恢復(fù)至室溫后,PBS洗3次,隨后按選定好的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。

5.電爐加熱抗原修復(fù)法:

①切片脫蠟至水。

②0.3%H2O2甲醇處理切片10分鐘。

③自來(lái)水洗,蒸餾水洗。

④ 將切片放入抗原修復(fù)液中于電爐上加熱,不時(shí)用溫度計(jì)測(cè)量溫度,當(dāng)達(dá)92℃后,即可拔離電源,當(dāng)溫度低于92℃時(shí),再插上電源,如此反復(fù)持續(xù)至10分鐘左右。

⑤待抗原修復(fù)液降至室溫后,PBS洗3次,隨后按選定的免疫組化染色方法進(jìn)行染色。

對(duì)各種抗原修復(fù)方法的評(píng)價(jià)。

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