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雞新城疫血凝(HA)和血凝抑制(HI)抗體的測定

時間:2013-7-31閱讀:851
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1.實驗內(nèi)容或原理

某些病毒(如新城疫病毒,禽流感病毒等)能夠與動物的紅細胞發(fā)生凝集,此即為紅細胞凝集現(xiàn)象(HA)。這種紅細胞凝集現(xiàn)象可于病毒懸液中加入特異免疫血清所抑制,即為紅細胞凝集抑制試驗(HI)。

2.需用的儀器或試劑等

動物 健康成雞2-5只,被檢雞15-25只。

器材 高壓滅菌器、濾紙、試管、試管架、離心機、離心管、*、內(nèi)徑2mm聚乙烯塑料管100cm、酒精燈、石蠟、96孔V型微量凝集試驗板、0.025mm微量吸液器、微型振蕩器、微量移液器、脫脂棉等。

藥劑(1)濃縮抗原;(2)生理鹽水或磷酸緩沖鹽水(PBS);(3)Alsever細胞保存液;(4)紅細胞懸液;(5)待檢血清

3.實驗步驟

(1)發(fā)現(xiàn)與鑒定病毒:雞新城疫和禽流感病毒分離后,這些病毒能凝集雞的紅細胞,又能被特異性的已知免疫血清抑制其凝集反應(yīng),即可鑒定此病毒。

 (2)診斷病毒性疾?。喝缛⊥话l(fā)病的動物早期和恢復(fù)期血清進行紅細胞凝集抑制實驗,如抗體效價有4倍以上升高,即有診斷意義。

(3)免疫機體抗體效價的測定:

 4.雞新城疫(ND)的HA和HI

(1)試驗準備

 ① 抗原:一般以雞新城疫Ⅱ系或LaUra系凍干苗作為已知抗原,進行試驗。

 ② 0.7%細胞懸浮液:由雞翅靜脈或心臟采血,放入含有抗凝劑的滅菌試管(按每毫升血加入3.8%滅菌檸檬酸鈉0.2毫升做抗凝劑)內(nèi),迅速混勻。如當時不用,可直接采血放入*內(nèi)(保存液2份,血液1份)于4℃冰箱內(nèi)可保存兩周。

紅細胞懸液的配制:將血液注入離心管中,經(jīng)3000轉(zhuǎn)/分鐘,離心5-10分鐘,用吸管吸去上清液和紅細胞上層的白細胞薄膜,將沉淀的紅細胞加稀釋液(生理鹽水)洗滌。再用離心機3000轉(zhuǎn)/分鐘離心5-10分鐘,棄上清,再加稀釋液洗滌,如此反復(fù)洗滌三次,將zui后一次離心后的紅細胞泥,按0.7%的稀釋度加入稀釋液(0.7毫升紅細胞泥加99.3毫升稀釋液)。

 ③ 被檢血清:將被檢雞群編號登記,用消毒過的干燥注射器采血,注入潔凈干燥試管內(nèi)(微量法可用孔徑2-3毫米塑料管由翅靜脈采血),在室溫中靜置或離心,待血清析出后使用。每只雞應(yīng)更換一個注射器,嚴禁交叉使用。

④ 稀釋液:為滅菌的生理鹽水。

⑤ *的配制方法:葡萄糖2.05克,檸檬酸鈉(SHOO)0.80克,檸檬酸(2H20)0.055克,氯化鈉0.42克,蒸餾水加至100毫升。過濾分裝,高壓滅菌10分鐘,放4℃冰箱保存。

(2)紅細胞凝集試驗(HA)   主要是測定病毒的紅細胞凝集價,以確定紅細胞凝集抑制試驗所用病毒稀釋倍數(shù)(抗原單位)。

雞新城疫病毒的HA試驗與HI試驗現(xiàn)采用微量法,以u或v形微孔塑料板代替試管。

① 首先用移液器向每個孔加入稀釋液一滴(0.05毫升)。

② 用微量移液器取病毒抗原0.05毫升,加入*孔,反復(fù)抽動6次后,吸出0.05毫升加入第二孔,在第二孔反復(fù)抽動6次后,吸出0.05毫升加入第三孔,如此連續(xù)稀釋至第十一孔后吸出0.05毫升棄去。第12孔不加病毒液為紅細胞空白對照。

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