實驗原理
        堿裂解法提取質(zhì)粒是根據(jù)共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA與線性染色體DNA在拓撲學上的差異來分離它們。在pH值介于12.0~12.5這個狹窄的范圍內(nèi),線性的DNA雙螺旋結構解開而被變性,盡管在這樣的條件下,共價閉環(huán)質(zhì)粒DNA的氫鍵會被斷裂,但兩條互補鏈彼此相互盤繞,仍會緊密地結合在一起。當加入pH4.8的乙酸鉀高鹽緩沖液恢復Ph至中性時，共價閉合環(huán)狀質(zhì)粒DNA的兩條互補鏈仍保持在一起，因此復性迅速而準確，在而線性的染色體DNA的兩條互補鏈彼此已*分開，復性就不會那么迅速而準確，它們纏繞形成網(wǎng)狀結構，通過離心，染色體DNA與不穩(wěn)定的大分子RNA、蛋白質(zhì)-SDS復合物等一起沉淀下來而被除去。
實驗材料
1.葡萄糖 2.三羥甲基氨基甲烷（Tris）
3.乙二胺四乙酸（EDTA） 4.氫氧化鈉
5.十二烷基硫酸鈉（SDS） 6.乙酸鉀
7.冰乙酸 8.氯仿
9.乙醇 10.胰RNA酶
11.氨芐* 12.蔗糖
13.溴酚藍 14.酚
15.β巰基乙醇 16.鹽酸
17.含pUC18質(zhì)粒的大腸桿菌
實驗步驟
提取質(zhì)粒
1．將2ml含相應抗生素的LB液體培養(yǎng)基加入到試管中，接入含質(zhì)粒的大腸桿菌，37℃振蕩培養(yǎng)過夜。
2．取1.5ml培養(yǎng)物倒入微量離心管中，4000rpm，離心2min。
3．吸去培養(yǎng)液，使細胞沉淀盡可能干燥。
4．將細菌沉淀懸浮于100μl溶液Ⅰ中，充分混勻，室溫放置10 min。
5．加200μl溶液Ⅱ（新鮮配制），混勻內(nèi)容物，將離心管放冰上5 min。
6．加入150μl溶液Ⅲ（冰上預冷），蓋緊管口，顛倒數(shù)次使混勻。
7．1200rpm，離心15 min，將上清轉(zhuǎn)至另一離心管中。
8．向上清中加入等體積酚：氯仿（去蛋白），反復混勻，12000rpm，離心5min,將上清轉(zhuǎn)移到另一離心管中.
9.向上清加入2倍體積乙醇,混勻后,室溫放置5-10min。12000rpm離心5min。倒去上清液，把離心管倒扣在吸水紙上，吸干液體。
10．用1ml70%乙醇洗滌質(zhì)粒DNA沉淀，振蕩并離心，倒去上清液，真空抽干或空氣中干燥。
11．加50μl TE緩沖液，其中含有20μg/ml的胰RNA酶，使DNA*溶解，-20℃保存。