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質(zhì)粒抽提的竅門(mén)

時(shí)間:2013-5-17閱讀:504
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1:搖菌時(shí)間 - 過(guò)夜培養(yǎng)是一個(gè)普遍接受的概念,而且適合大部分情況。如果出現(xiàn)了問(wèn)題,調(diào)整培養(yǎng)時(shí)間會(huì)有幫助:Nick 多,則增加培養(yǎng)時(shí)間;酶切出現(xiàn)問(wèn)題,則減少培養(yǎng)時(shí)間。
2:起始菌體量 - 大家習(xí)慣說(shuō)“從多少 ml 菌液中抽提質(zhì)粒”,但一定要養(yǎng)成每次都觀察菌體量的習(xí)慣,因?yàn)橘|(zhì)粒畢竟是在菌體中,而且,抽提質(zhì)粒所用的試劑量,都只與菌體量有關(guān)。
3:菌體的*懸浮 - 如果沒(méi)有*懸浮菌體,則殘留的菌體團(tuán)塊在溶液 II 加入后,變成一個(gè)外圍幾乎*裂解,往里不*裂解,中間沒(méi)有裂解的團(tuán)塊。這個(gè)團(tuán)塊在溶液 III 加入后,會(huì)有一部分蛋白質(zhì)繼續(xù)存在于溶液中,成為蛋白質(zhì)殘留的zui大根源。
4:使用相對(duì)過(guò)量的試劑 - 這是適合所有核酸抽提的建議。試劑相對(duì)過(guò)量的好處是:穩(wěn)定性好,純度高,操作更簡(jiǎn)單。如果認(rèn)為這樣不經(jīng)濟(jì),就少用一點(diǎn)菌體。
5:裂解時(shí)間 - 加入溶液 II 后,混勻,體系能立即變得清澈。體系如果變得清澈了,馬上加入溶液 III 中和。如果體系不馬上變清澈,下次少用一點(diǎn)菌液,或者多用一點(diǎn)溶液。如今的質(zhì)粒設(shè)計(jì)得越來(lái)越復(fù)雜了,奇怪的現(xiàn)象也越來(lái)越多,而所有的奇怪現(xiàn)象,多與裂解時(shí)間有關(guān)。
6:中和的操作 - 在 1.5ml 離心管中加入溶液 III 后,先顛倒兩次,使管底朝上,用指頭彈擊管底數(shù)次,再顛倒混勻。效果非常好。
7:中和后的離心去蛋白 - 一定要將蛋白質(zhì)*離心下去。如果發(fā)現(xiàn)離心后仍然有蛋白質(zhì)漂浮在液面,繼續(xù)離心的效果并不好;而將上清倒入另外一個(gè)離心管中,再離心,效果要好許多

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