產(chǎn)品名稱
通用名稱：三聚氰胺檢測試劑盒
英文名稱：ELISA Kit to Detect Melamine
產(chǎn)品編號：TH056-1
概要
三聚氰胺是一種化工原料，主要用于涂料、塑料、肥料和清潔產(chǎn)品等。不法商販為了提高蛋白質(zhì)含量，常將三聚氰胺添加在牛奶及奶制品中。三聚氰胺在食品中危害*，可導(dǎo)致嬰兒腎結(jié)石和腎功能衰竭。三聚氰胺酶聯(lián)免疫試劑盒具有方便、快速、靈敏等特點，適用于現(xiàn)場大批量樣品檢測。
包裝規(guī)格
96T/盒
預(yù)期用途
可定性、定量檢測牛奶、奶粉及飼料等樣本中的三聚氰胺的殘留量。
測定原理
樣品中游離的三聚氰胺與酶標(biāo)板上固定的三聚氰胺抗原特異性競爭抗體，酶標(biāo)二抗可與抗體反應(yīng)，然后洗掉游離的酶標(biāo)二抗和抗體，再通過被固定的酶催化顯色劑顯色，根據(jù)顯色的深淺來判斷樣品中三聚氰胺的含量。根據(jù)競爭性原理，如果樣品中的游離三聚氰胺量少，則酶標(biāo)二抗結(jié)合多，顯色深，反之，則顯色淺。
產(chǎn)品組成
1、三聚氰胺酶標(biāo)板：96孔
2、三聚氰胺標(biāo)準(zhǔn)品：6瓶（1ml/瓶）,含量分別是：
0ppb，1 ppb，3ppb，9ppb，27ppb，81ppb
3、三聚氰胺高濃度標(biāo)準(zhǔn)品（添加回收實驗）：10ppm
4、三聚氰胺抗體工作液：1瓶（7ml）， 直接使用
5、三聚氰胺酶標(biāo)二抗：1瓶（13ml），直接使用
6、三聚氰胺底物液A：1瓶（7ml），過氧化脲
7、三聚氰胺底物液B：1瓶（7ml），四甲基聯(lián)苯胺
8、三聚氰胺終止液：1瓶（7ml），2M硫酸
9、10×濃縮洗滌液：1瓶（50ml），用于洗板
10、說明書一份
11、質(zhì)檢報告一份
12、蓋板膜一張
使用單位需自備的設(shè)備及試劑
設(shè)備：
┅┅微孔板酶標(biāo)儀
┅┅均質(zhì)器
┅┅振蕩器
┅┅離心機
┅┅天平，精度0.01g
┅┅微量移液器：單道20μl ~200μl、100μl~1000μl
多道50μl~300μl
試劑：
┅┅去離子水
溶液配制
1×洗滌工作液：
取50ml 10×濃縮洗滌液，加去離子水450ml，混勻?？稍?-8℃保存三個月。
待測樣品處理方法
1、液態(tài)奶（稀釋系數(shù)20）
1) 取液態(tài)奶50μl于潔凈離心管中，加入950μl去離子水，充分混勻，
2) 室溫4000g離心5min，去除上層脂肪層（脫脂或低脂奶此步可?。?/p>
3) 取50μl用于檢測。
2、奶粉、飼料（稀釋系數(shù)200）
1) 稱取1±0.05g樣品（飼料需粉碎）于50ml離心管中，加入10ml去離子水充分混勻；
2) 取50μl加入950μl去離子水，再次充分混勻；
3) 室溫4000g離心5min；
4) 取50μl上清用于檢測。
注意事項
1) 使用前將試劑盒回升至室溫（20-25℃）。
2) 嚴(yán)格按說明書操作，不得改變加樣順序及溫育時間，
每加一種試劑前需將其搖勻。
3) 盡量縮短加樣時間，加入相同試劑或樣品時應(yīng)使用多道微量移液器。
4) 洗板應(yīng)保持*性，不可更改沖洗次數(shù)。洗滌后，避免微孔干燥，否則可能會造成標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性或重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
5) 若底物液B有任何顏色表明其變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑盒可能變質(zhì)。
6) 若酶標(biāo)板底部被污染，則在讀數(shù)之前用軟紙輕輕擦試微孔板底部，防止因污染而影響讀數(shù)結(jié)果。
7) 在所有恒溫孵育過程中，要避免光線照射，應(yīng)用蓋板膜蓋住微孔板。
8) 沒有用完的微孔板應(yīng)存放回有干燥劑的密封袋內(nèi)，2-8℃密封干燥保存，試劑盒避免冷凍。
9) 不要使用過期的試劑盒及各組份，不要同時使用不同批號試劑盒中的試劑。
酶免分析步驟
1、將標(biāo)準(zhǔn)品和樣品對應(yīng)的微孔編號，每個標(biāo)準(zhǔn)品和樣品做雙孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置。
2、在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入50l各標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在各樣品孔中加入50l樣品溶液。
3、在所有孔中加入50l的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光反應(yīng)30分鐘。
4、小心揭開蓋板膜，甩干孔中液體，用稀釋好的洗滌液（250μl/孔）充分洗滌微孔板3次，在吸水紙上拍干（拍干后未清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
5、在所有孔中加入100l的酶標(biāo)二抗，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光反應(yīng)30分鐘。取出酶標(biāo)板，按步驟4洗板5次。
6、洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50l底物液A，再加 50l底物液B，輕微晃動反應(yīng)板使之*混勻，25℃環(huán)境避光顯色15分鐘 (在顏色淺的情況下可適當(dāng)延長反應(yīng)時間，但總顯色時間不要超過30分鐘)。
7、每孔中加入50l終止液，輕輕晃動使之*混勻，在450nm（建議使用雙波長450/630nm）下檢測吸光度，結(jié)果在5分鐘內(nèi)讀取。
結(jié)果計算
1、所獲得的標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本的每個濃度吸光度值的平均值（B）除以*個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B0）再乘以*,即百分吸光度值。
2、以三聚氰胺濃度的對數(shù)值為X軸,百分吸光度值為Y軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。根據(jù)樣品百分吸光度值,可從曲線上得到對應(yīng)點的橫坐標(biāo),即為三聚氰胺濃度的對數(shù)值,求得反對數(shù)即為測定液中三聚氰胺濃度C（ng/ml）。樣本經(jīng)過稀釋時應(yīng)乘以相應(yīng)稀釋系數(shù)。
樣品檢測下限
本試劑盒的zui低檢測靈敏度是1ppb(1ng/ml、1μg/l或1μg/kg)。
交叉反應(yīng)(特異性)
三聚氰胺……………………………………*
樣品zui低檢測限
液態(tài)奶………………………………………20ppb
奶粉、飼料…………………………………200ppb
準(zhǔn)確度（回收率）
液態(tài)奶………………………………………95±15％
奶粉、飼料…………………………………95±15％
精密度
試劑盒板內(nèi)變異系數(shù)小于8%，板間變異系數(shù)小于15%。
貯藏條件及保存期
產(chǎn)品保存于2-8℃，自生產(chǎn)日期起12個月內(nèi)有效。
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