| 50112檢測(cè)高效相色譜儀 1 簡(jiǎn)介 本文參照GB/T 17819-1999標(biāo)準(zhǔn)采用了501系列高效液相色譜法測(cè)定維生素預(yù)混料中12的方法。501高效液相色譜儀適用于維生素預(yù)混料、12預(yù)混制劑中12的測(cè)定。檢測(cè)范圍為每千克樣品中12含量大于0.25mg, 2 方法原理 試樣中12用水提取，經(jīng)高效液相色譜反相柱分離，其峰面積與12的含量成正比 3 試劑和材料 本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑除特殊注明外，均為優(yōu)級(jí)純，水為去離子水。 3.1 乙睛:色譜純。 3.2 正磷酸溶液 3.3 25%乙醇溶液 3.4 12標(biāo)準(zhǔn)溶液。 3.4.1 12標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液:準(zhǔn)確稱取0.1000g12純品(符合USP),溶解于100Ml乙醇溶液(3.3)中，并稀釋定容至刻度，搖勻。該標(biāo)準(zhǔn)貯備液每毫升含12 1mg. 3.4.2 12標(biāo)準(zhǔn)工作液:準(zhǔn)確吸取12標(biāo)準(zhǔn)貯備液(3.4.1)1mL于50Ml容量瓶中，用移動(dòng)相稀釋定容刻度，搖勻。該標(biāo)準(zhǔn)工作液1Ml含12 2ug 4 儀器、設(shè)備 4.1 實(shí)驗(yàn)室常用設(shè)備。 4.2 超聲波水浴。 4.3 高效液相色譜儀:進(jìn)口手動(dòng)進(jìn)樣器（自動(dòng)進(jìn)樣器）,501高效液相色譜儀、紫外可調(diào)波長(zhǎng)檢驗(yàn)器 4.4 超純水裝置 4.5 離心機(jī):3000r/min. 5 試樣制備 取具有代表性樣品至少500g，用四分法縮分至100g， 粉碎，全部過(guò)0.28mm 孔篩混勻，裝入樣品瓶?jī)?nèi)密閉，避光低溫保存?zhèn)溆谩?/span> 6 分析步驟 6.1 提取 6.1.1 維生素預(yù)混料中12的提取 稱取試樣 2-3g (精確至士0.0001g )，置于100mL棕色容量瓶中，加約60mL去離子水，在超聲波水浴中超聲提取15min，取出，用去離子水定容至刻度，混勻，過(guò)濾，濾液過(guò)0.45um濾膜，供高效液相色譜儀分析。 6.1.2 12制劑(1%-2%)的提取 稱取試樣1g(精確至±0.0001g)于100mL棕色容量瓶中，加人約60mL去離子水，在超聲波水 浴中超聲提取10min，取出用去離子水定容過(guò)濾。精確吸取1.00mL溶液于50mL棕色容量瓶中，用去離子水定容至刻度，該液通過(guò)0.45um濾膜過(guò)濾，供高效液相色譜儀分析 6.2 測(cè)定步驟 6.2.1 色譜條件 柱子 :u-Bondpak NH2,粒度5um,3.9mm×300mm。Vertex NH2色譜柱，5um，4.6×250mm 柱溫 :30℃。 流動(dòng)相 : 3%正磷酸水溶液260mL與700mL乙膀混合，超聲脫氣。 流速 : 1.7mL/min, 檢測(cè)波長(zhǎng) :361nm。 6.2.2 定量測(cè)定 按高效液相色譜儀說(shuō)明書調(diào)整儀器操作參數(shù)，用兩次以上相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)工作液，對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行校正。 將通過(guò)0.45um濾膜的樣液(6.1.1)依次分裝于自動(dòng)進(jìn)樣小瓶中，依外標(biāo)法上液相色譜儀測(cè)定 6.2.3 也可采用反相離子對(duì)高效液相色譜測(cè)定12的方法(見附錄A) 7 測(cè)定結(jié)果的計(jì)算 測(cè)定結(jié)果按式(1)計(jì)算w1=Pi×V×pi×Vst/Pn×m×Vi 式中w1一每千克樣品中12的含量，mg; m- 試樣質(zhì)量，g; Vi-試樣溶液進(jìn)樣體積,uL; Pi-試樣溶液峰面積值; V-試樣稀釋的體積，mL; Pi-標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，ug/mL; Vst-標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣體積,uL; Pn-標(biāo)準(zhǔn)溶液峰面積平均值。 每個(gè)試樣取兩份試料進(jìn)行平行測(cè)定，以其算術(shù)平均值為測(cè)定結(jié)果。結(jié)果表示到每千克樣品中12 O.01mg 8 允許差 同一分析者對(duì)同一試樣同時(shí)兩次平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差應(yīng)不大于15% 反相離子對(duì)高效液相色譜測(cè)定預(yù)混料中維生案B12 A1 原理 試樣中12經(jīng)水提取后，注人反相色譜柱上，由于輸入了有機(jī)的反相離子對(duì)四丁基磷酸銨(PIC A)和己烷磺酸鈉(PIC-B6)溶掖，12的陽(yáng)離子與移動(dòng)相中陰離子形成離子偶化合物，在移動(dòng)過(guò)程中與固定相分開達(dá)到分離. A2 試劑和材料 1 甲醇(優(yōu)級(jí)純)。2 磷酸。 3 四丁基磷酸銨(PIC A),4 己烷磺酸鈉(PIC-B6), A3 測(cè)定色譜條件 柱子 :150 m×4.0mm(內(nèi)徑)不銹鋼柱。VertexC18色譜柱，250mm×4.6，5um進(jìn)口 固定相 :u-Bondpak C18(ODS)粒度5um, 移動(dòng)相 :甲醇-水(250+750)約980mL，加入PICA/PICB6(各一小瓶)20mL，用上述25%甲醇水定 容至1L,混勻，用磷酸調(diào)節(jié)pH3,流速 :1ml/min, 柱溫 :室溫 檢測(cè)器 :紫外檢測(cè)器，使用波長(zhǎng)365nm, 進(jìn)樣量 : 20uL,保留時(shí)間 :約7.0min 關(guān)鍵詞：12液相色譜儀，飼料檢測(cè)高效液相色譜儀，維生素預(yù)混料中12測(cè)定高效相色譜法，國(guó)產(chǎn)液相色譜儀，12高效液相色譜法。 | 
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