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高效液相色譜柱

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詞料中*的測(cè)定液相色譜法GB/T 19684-2005

閱讀:1173發(fā)布時(shí)間:2012-3-15

 

詞料中*的測(cè)定液相色譜法GB/T 19684-2005
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了以液相色譜(HPLC)測(cè)定飼料中*的方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、濃縮飼料和預(yù)混合飼料中*的測(cè)定,檢測(cè)限為1n g,zui低檢出濃度為4 mg/kg.
2 規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過在本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件,其隨后所
有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn),然而,鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的版本。凡是不注日期的引用文件,其版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
GB /T 6 682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
GB /T 14699.1 飼料采樣
3 方法原理
使用鹽酸-丙酮溶液提取飼料中的*,調(diào)至pHl.0 -1.2 ,振蕩,過濾,注人反相柱分離,紫外檢測(cè)器檢測(cè),外標(biāo)法定量分析。
4 試荊和材料
本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑,除特別注明外,均為分析純。水為蒸餾水,色譜用水為去離子水,符合GB/T 6682用水的規(guī)定。
4.1 氫氧化鈉溶液:400 g/L.
4.2 乙二酸(草酸)溶液:[c(1/2HZC20,)=0.01 mol/L].
4.3 鹽酸溶液:[c(HCI)=4 mol/L].
4.4 提取液:丙酮十鹽酸溶液(4.3)+水=13十1十6.
4.5 流動(dòng)相:乙二酸溶液(4.2)+乙睛(色譜純)+甲醇(色譜純)=10十3十2.
4.6 *標(biāo)準(zhǔn)液:
4.6.1 *標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液準(zhǔn)確稱取*標(biāo)準(zhǔn)品0.012 90g(含量大于96.9%,儲(chǔ)存于硅膠干燥器中),至0.1 m g,置于50m L容量瓶中,用提取液(4.4)溶解并定容至刻度,搖勻,其濃度為250g /L,
貯于4℃~ 6℃ 冰箱中,有效期為一周。
4.6.2 *標(biāo)準(zhǔn)工作液準(zhǔn)確移取4 mI一*標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液((4.6.1)于10 mL容量瓶中,用超純水稀釋至刻度,搖勻,其濃度為100 g/L,現(xiàn)用現(xiàn)配。
5 儀器、設(shè)備
5.1 離心機(jī):3 000 r/mine
5.2 pH計(jì):精度0.0 1m V.
5.3 恒溫振蕩器:300 r/min.
5.4 微孔濾膜(孔徑0. 45 pm).
5.5 分析天平:感量0. 1 mgo
5.6 分析天平:感量0.0 1m g.
GB/T 19684-2005
5.7 GE-200液相色譜儀 GE-200高壓*,GE-200紫外檢測(cè)器,浙大智達(dá)N2010色譜工作站,VertexC18色譜柱。
6 試樣的選取和制備
按 G B/ T 14699.1 選取有代表性樣品200g -500g ,用四分法縮至100g ,粉碎通過0.45m m孔徑篩,充分混勻,貯于磨口瓶中備用。
7 分析步驟
7.1 稱取試樣lg-10g(*含量大于等于40m g/kg),準(zhǔn)確至0.1 m g,置于具塞錐形瓶中,加人
100 mL提取液(4.4),手搖2 min,再用鹽酸溶液(4.3)調(diào)pH至1. 0-1. 2(記錄鹽酸溶液的消耗量,作為稀釋倍數(shù)),蓋緊塞子,置恒溫震蕩器(5. 3)中(振蕩速度110 r/min)振蕩30 mine
7.2 將提取液(7.1)倒人離心管,3000 r/min離心15 min,
7.3 取離心上清液用濾膜(5.4)過濾,濾液作為試樣溶液。
7.4 HPLC測(cè)定參數(shù)的設(shè)定:
分 析柱 C18:柱長(zhǎng)150mm,內(nèi)徑4.6mm,粒度5um(或類似分析柱);
柱 溫 :室 溫;
檢 測(cè) 器 :紫外檢測(cè)器,檢測(cè)波長(zhǎng)375nm;
流 動(dòng) 相 速度:1.0 m L/min;
進(jìn)樣 量 : 10ul-20ul
7.5 定量測(cè)定:采用多點(diǎn)外標(biāo)法,根據(jù)濃度與峰面積的線性回歸方程計(jì)算*的含量(g/L)
8 測(cè)定結(jié)果的計(jì)算
8.1 每千克試樣中所含*的質(zhì)量X(mg)按式(1)計(jì)算:
X=m1\×n
式 中 :
X— 每千克試樣中所含*的質(zhì)量,單位為毫克(mg);
M1--HPLC試樣色譜峰對(duì)應(yīng)的*質(zhì)量,單位為微克(ug);
m— 試樣質(zhì)量,單位為克(g);
n— 稀釋倍數(shù)。
8.2 測(cè)定結(jié)果用平行樣測(cè)定的算術(shù)平均值表示,保留至小數(shù)點(diǎn)后1位。
9 允許差
兩個(gè)平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差不大于7%0

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