詞料中*的測(cè)定液相色譜法GB/T 19684-2005
1 范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了以液相色譜（HPLC）測(cè)定飼料中*的方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、濃縮飼料和預(yù)混合飼料中*的測(cè)定，檢測(cè)限為1n g，zui低檢出濃度為4 mg/kg.
2 規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過(guò)在本標(biāo)準(zhǔn)的引用而成為本標(biāo)準(zhǔn)的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所
有的修改單（不包括勘誤的內(nèi)容）或修訂版均不適用于本標(biāo)準(zhǔn)，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本標(biāo)準(zhǔn)達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的版本。凡是不注日期的引用文件，其版本適用于本標(biāo)準(zhǔn)。
GB /T 6 682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法
GB /T 14699.1 飼料采樣
3 方法原理
使用鹽酸-丙酮溶液提取飼料中的*，調(diào)至pHl.0 -1.2 ，振蕩，過(guò)濾，注人反相柱分離，紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量分析。
4 試荊和材料
本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑，除特別注明外，均為分析純。水為蒸餾水，色譜用水為去離子水，符合GB/T 6682用水的規(guī)定。
4.1 氫氧化鈉溶液：400 g/L.
4.2 乙二酸（草酸）溶液：[c（1/2HZC20,）=0.01 mol/L].
4.3 鹽酸溶液：[c（HCI）=4 mol/L].
4.4 提取液：丙酮十鹽酸溶液（4.3）＋水＝13十1十6.
4.5 流動(dòng)相：乙二酸溶液（4.2）＋乙睛（色譜純）＋甲醇（色譜純）=10十3十2.
4.6 *標(biāo)準(zhǔn)液：
4.6.1 *標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液準(zhǔn)確稱取*標(biāo)準(zhǔn)品0.012 90g（含量大于96.9%，儲(chǔ)存于硅膠干燥器中），至0.1 m g，置于50m L容量瓶中，用提取液（4.4）溶解并定容至刻度，搖勻，其濃度為250g /L,
貯于4℃～ 6℃ 冰箱中，有效期為一周。
4.6.2 *標(biāo)準(zhǔn)工作液準(zhǔn)確移取4 mI一*標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（（4.6.1）于10 mL容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，搖勻，其濃度為100 g/L，現(xiàn)用現(xiàn)配。
5 儀器、設(shè)備
5.1 離心機(jī)：3 000 r/mine
5.2 pH計(jì)：精度0.0 1m V.
5.3 恒溫振蕩器：300 r/min.
5.4 微孔濾膜（孔徑0. 45 pm）.
5.5 分析天平：感量0. 1 mgo
5.6 分析天平：感量0.0 1m g.
GB/T 19684-2005
5.7 GE-200液相色譜儀 GE-200高壓*，GE-200紫外檢測(cè)器，浙大智達(dá)N2010色譜工作站，VertexC18色譜柱。
6 試樣的選取和制備
按 G B/ T 14699.1 選取有代表性樣品200g -500g ，用四分法縮至100g ，粉碎通過(guò)0.45m m孔徑篩，充分混勻，貯于磨口瓶中備用。
7 分析步驟
7.1 稱取試樣lg-10g（*含量大于等于40m g/kg），準(zhǔn)確至0.1 m g，置于具塞錐形瓶中，加人
100 mL提取液（4.4），手搖2 min，再用鹽酸溶液（4.3）調(diào)pH至1. 0-1. 2（記錄鹽酸溶液的消耗量，作為稀釋倍數(shù)），蓋緊塞子，置恒溫震蕩器（5. 3）中（振蕩速度110 r/min）振蕩30 mine
7.2 將提取液（7.1）倒人離心管，3000 r/min離心15 min,
7.3 取離心上清液用濾膜（5.4）過(guò)濾，濾液作為試樣溶液。
7.4 HPLC測(cè)定參數(shù)的設(shè)定：
分 析柱 C18：柱長(zhǎng)150mm，內(nèi)徑4.6mm，粒度5um（或類似分析柱）；
柱 溫 ：室 溫；
檢 測(cè) 器 ：紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)375nm;
流 動(dòng) 相 速度：1.0 m L/min;
進(jìn)樣 量 ： 10ul-20ul
7.5 定量測(cè)定：采用多點(diǎn)外標(biāo)法，根據(jù)濃度與峰面積的線性回歸方程計(jì)算*的含量（g/L）
8 測(cè)定結(jié)果的計(jì)算
8.1 每千克試樣中所含*的質(zhì)量X（mg）按式（1）計(jì)算：
X＝m1\×n
式 中 ：
X— 每千克試樣中所含*的質(zhì)量，單位為毫克（mg）;
M1--HPLC試樣色譜峰對(duì)應(yīng)的*質(zhì)量，單位為微克（ug）;
m— 試樣質(zhì)量，單位為克（g）；
n— 稀釋倍數(shù)。
8.2 測(cè)定結(jié)果用平行樣測(cè)定的算術(shù)平均值表示，保留至小數(shù)點(diǎn)后1位。
9 允許差
兩個(gè)平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差不大于7％0
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