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EAR3 elisa酶聯(lián)免疫試劑盒圖片

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更新時間:2018-03-13 10:50:28瀏覽次數(shù):714次

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包裝:液體盒裝(48T/96T)
貯藏:2—8°C,避光防潮保存。
有效期:6個月
EAR3 elisa酶聯(lián)免疫試劑盒圖片檢測中樣品的處理
.細(xì)胞培養(yǎng)物上清:細(xì)胞培養(yǎng)物于室溫000g,離心0分鐘后收集上清,并將標(biāo)本保存于-20℃,且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.血清:標(biāo)本請于室溫放置2小時或4℃過夜后于000g,4℃離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2-8℃,000g離心5分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
4.尿液:無菌收集取初尿,離心除去沉淀物,即可用于檢測,要保存尿樣,可以加入0.05%的NaN3在4-8℃保存,或加入尿樣冰凍保護(hù)液放入-20℃冰箱保存。
5.組織勻漿:將組織標(biāo)本先用PBS洗滌,除去多余血液,勻漿化后放在PBS于-20℃放置過夜,再經(jīng)過二次反復(fù)凍融破膜,5000g,4℃離心5分鐘,取上清即可檢測。注:取樣和樣品處理過程中,防止有毒物質(zhì)對操作人員的危害,要采取相應(yīng)的保護(hù)措施。
操作步驟:
. 取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30 分鐘。
2. 分組:取出 96 孔板,根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6 個濃度)、空白孔、待測樣品組。
注:為減少實驗誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。
3. 加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 00ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入 00ul 的蒸餾水;其余微孔中加入00ul 的待測樣本。
4. 加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入 50ul 的酶標(biāo)溶液(空白對照孔除外)。
5. 溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 小時。
6. 洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置 5-30s,充分清洗酶標(biāo)板 5 次,用吸水紙*拍干。
7. 顯色:各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后,再加入顯色劑 B 液 50ul。
8. 終止:25-37℃下避光反應(yīng) 0-5 分鐘,加入 50ul 終止液。
9. 讀板:在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。
elisa酶聯(lián)免疫試劑盒(間接法)
() 抗原包被:用包被液將PEDV抗原作∶5稀釋包被反應(yīng)板,每孔00μl,同時設(shè)陰性細(xì)胞培養(yǎng)物對照孔,置4℃過夜。
(2) 洗滌:用洗滌液洗滌2次,每次2min,瀝干。
(3) 加入被檢血清:用保溫液將被檢血清作∶00稀釋,加入反應(yīng)板相鄰的兩個孔中,每孔00μl。同時作陰、陽性標(biāo)準(zhǔn)血清對照,置37℃孵育h。
(4) 洗滌3次:方法同上。
(5) 加入酶結(jié)合物:用保溫液將酶結(jié)合物作∶4 000稀釋,加入反應(yīng)孔中,每孔00μl,置37℃孵育h。
(6) 洗滌3次:方法同上。
(7) 加入底物:每孔00μl,置室溫暗盒內(nèi)顯色20min。
(8) 加入終止液:每孔50μl,靜置5min。
(9) 測定OD值:用檢測儀,于492nm波長,按儀器使用及制定標(biāo)準(zhǔn)要求調(diào)節(jié)儀器,測定各反應(yīng)孔的OD值,記錄結(jié)果。
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