有多少人使用elisa試劑盒操作實(shí)驗(yàn)?zāi)?關(guān)于elisa試劑盒您又了解關(guān)少呢?您知道elisa試劑盒的包被形式嗎?今天呢上海恒遠(yuǎn)生物將為您解說(shuō)的就是elisa試劑盒的包被形式，elisa實(shí)驗(yàn)的靈敏度較高、特異性也比較好，然而因此特點(diǎn)在臨床上得到了較為廣泛的應(yīng)用，操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，就很有可能會(huì)導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。廢話不多說(shuō)，我們將重點(diǎn)放在elisa試劑盒的包被形式上，請(qǐng)您耐心閱讀!

   我們將抗原或抗體固定在過(guò)程稱為包被。換句話來(lái)說(shuō)，包被就是抗原或抗體結(jié)合到固相載體表面的過(guò)程。

   蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過(guò)物理吸附結(jié)合的，靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的作用于。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質(zhì)的分子量、等電點(diǎn)、濃度等的影響。

   載體對(duì)不同蛋白質(zhì)的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質(zhì)較小分子蛋白質(zhì)通常含有更多的疏水基團(tuán)，故更易吸附到固相載體表面。IgG對(duì)聚苯乙烯等固相具有較強(qiáng)的吸附力，其聯(lián)結(jié)多發(fā)生在Fc段上，抗體結(jié)合點(diǎn)暴露于外，因此抗體的包被一般均采用直接吸附法。

   蛋白質(zhì)抗原大多也可采用與抗體相似的方法包被。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時(shí)，抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分暴露，在這種情況下，直接包被效果不佳，可以采用間接的捕獲包被法，即先將針對(duì)該抗原的特異抗體作預(yù)包被，其后通過(guò)抗原抗體反應(yīng)使抗原固相化。此間接結(jié)合在固相上的抗原遠(yuǎn)離載體表面，其抗原決定簇也得以充分暴露。間接包被的抗原經(jīng)固相抗體的親和層析作用，包被在固相上的抗原純度大大提高，因此含雜質(zhì)較多的抗原也可采用捕獲包被法,試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改善，重復(fù)性亦佳。間接包被的另一優(yōu)點(diǎn)是抗原用量少，僅為直接包被的/0乃至于/00。不易吸附在聚苯乙烯載體上的非蛋白質(zhì)抗原可采用特殊的包被方式。例如，在檢測(cè)抗DNA抗體時(shí)，需用DNA作為包被抗原，而普遍的固相載體一般不能直接與核酸結(jié)合?？蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈，75cm照射2小時(shí))，以增加其吸附性能。

   固相載體先用堿性蛋白質(zhì)，如聚賴氨酸、等作預(yù)包被，也可提高核酸的結(jié)合力。也可用親和素系統(tǒng)作間接包被，即用親和素先包被載體，然后加入化的DNA，這種包被方法均勻、牢固，已擴(kuò)大應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測(cè)定。

   而脂類物質(zhì)無(wú)法與固相載體結(jié)合，可將其在有機(jī)溶劑中，比如乙醇，溶解后加入ELISA板孔中，開蓋置冰箱過(guò)夜或冷風(fēng)吹干，待酒精揮發(fā)后，讓脂質(zhì)自然干固在固相表面?？剐牧字贵w的ELISA試劑一般采用這種包被方式。

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