人6酮前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)ELISA Kit
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上海研盟生物科技有限公司
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更新時間:2016-03-30 18:34:47瀏覽次數(shù):621次
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產(chǎn)品名稱:二級淋巴組織趨化因子(SLC/CCL21)免疫組化試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T/100T
免疫組化試劑盒種屬:人、大鼠、小鼠、兔等各種種屬,咨詢
該試劑盒以 HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物(HRP Streptavidin Conjugate,HRP-SA)為基礎(chǔ),可用于檢測細胞、組織內(nèi)的特異性SLC/CCL21抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的SLC/CCL21一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后,用生物化二抗與一抗特異性結(jié)合,zui后加入 HRP-SA,形成抗原—特異一抗—*化二抗—HRP-SA 復(fù)合物,顯微鏡下觀察成像。
試劑盒所含試劑:
試劑 A 通透液:0.1% Triton-X 100 10 mL(選用)
試劑 B 封閉緩沖液(封閉用) 20 mL
試劑 C (*分裝)已稀釋的即用型 REG3 一抗(2.5ml)
試劑 D (*分裝)*化羊抗兔 IgG 1 支
(濃度 1.5 mg/mL,稀釋比為 1:300~1:500)50 μL+抗體稀釋液 20ml
試劑 E HRP-SA 復(fù)合物 1 支(濃度 1 μM,稀釋比 1:50~1:200)100 μL
試劑 F DAB 顯色液5ml
二級淋巴組織趨化因子(SLC/CCL21)免疫組化試劑盒石蠟包埋組織切片免疫染色實驗步驟( 建議方案 建議方案):
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 將待做切片置于切片架上,于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr;
2.脫蠟: 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片經(jīng)下行酒精水化,無水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min), 85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修復(fù): 根據(jù)抗體說明書*方法進行抗原修復(fù),常采用高壓、微波(溫度達到 98~100℃)或酶消化修復(fù)法,室溫自然冷卻,自來水沖洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗滌(2×2min)直接進入第 5 步封閉。
5.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用試劑 C(即用型一抗),37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過夜;
7.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
8.封閉: 滴加試劑 B,37℃濕盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗體稀釋液稀釋的*化二抗(試劑 D),37℃濕盒中孵育30 min;
10.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min);
11.封閉: 滴加試劑 Tween 20,37℃濕盒孵育封閉 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用抗體稀釋液稀釋的試劑 E(1:50~200,終濃度 5~20 nM),37℃濕盒中孵育 30 min;
13.洗滌: TBS-T 洗滌(3×5 min),TBS 洗滌(2×5 min);
14.顯色:應(yīng)用 DAB 溶液(試劑 F)顯色;
15.復(fù)染:自來水充分沖洗,復(fù)染,脫水,透明;
16.封片: 待組織標(biāo)本干后,用試劑緩沖甘油封固劑封片;
17.觀察成像: 顯微鏡下觀察成像。
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