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人8-異構前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)Elisa試劑盒作用分析

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人8-異構前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。

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人8-異構前列腺素F2α(8-epi-PGF2α)操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
100 ng/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液
50 ng/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
25 ng/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
12.5 ng/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
6.25 ng/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,
然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。    
4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此
重復5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50 μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進行。

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