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猴免疫球蛋白M(IgM)Elisa試劑盒分析使用

閱讀:557發(fā)布時間:2013-05-16

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猴免疫球蛋白M(IgM)操作步驟
1.  標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
16µg/ml  5號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
8.0µg/ml  4號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
4.0µg/ml  3號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.0µg/ml  2號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.0µg/ml  1號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150µl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 
2.  加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40µl,然后再加待測樣品10µl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.  溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。     
4.  配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.  洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此
重復(fù)5次,拍干。
6.  加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50µl,空白孔除外。  
7.  溫育:操作同3。
8.  洗滌:操作同5。
9.  顯色:每孔先加入顯色劑A50µl,再加入顯色劑B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘.
10.  終止:每孔加終止液50µl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.  測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。  測定應(yīng)在加終止
液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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猴免疫球蛋白M(IgM)標(biāo)本要求  
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能
馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。


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