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大鼠胰島素樣生長因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)Elisa試劑盒分析使用

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大鼠胰島素樣生長因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)標(biāo)本要求  
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能
馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含 NaN3的樣品,因NaN 3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。
大鼠胰島素樣生長因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)操作步驟
1.   標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。
30ng/ml  5 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
15ng/ml  4 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的5 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
7.5ng/ml   3 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的4 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
3.75ng/ml  2 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的3 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.875ng/ml   1 號標(biāo)準(zhǔn)品  150µl 的2 號標(biāo)準(zhǔn)品加入 150µl 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
 
 
2.   加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,
然后再加待測樣品 10 µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.   溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。      
4.   配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.   洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此
重復(fù)5 次,拍干。
6.   加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50µl,空白孔除外。  
7.   溫育:操作同 3。
8.   洗滌:操作同 5。
9.   顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15分鐘.
10.  終止:每孔加終止液50µl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11.  測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。  測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

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