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大鼠可溶性細胞間粘附分子1(sICAM -1)elisa試劑盒說明書

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大鼠可溶性細胞間粘附分子1(sICAM -1)標本要求  
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含 NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。
大鼠可溶性細胞間粘附分子1(sICAM -1)操作步驟
1.   標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
480 ng/L  5 號標準品  150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
240 ng/L  4 號標準品  150µl 的5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
120 ng/L  3 號標準品  150µl 的4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
60 ng/L  2 號標準品  150µl 的3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
30 ng/L  1 號標準品  150µl 的2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 
 
2.   加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,
然后再加待測樣品 10 µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.   溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。      
4.   配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.   洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此
重復5 次,拍干。
6.   加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。  
7.   溫育:操作同 3。
8.   洗滌:操作同 5。
9.   顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15分鐘.
10.  終止:每孔加終止液50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.  測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。  測定應在加終止
液后15 分鐘以內進行。

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