上海博研
大鼠腸促*肽（CCK）操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
800ng/L 5 號標準品 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
400ng/L 4 號標準品 150µl 的5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
200ng/L 3 號標準品 150µl 的4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
100 ng/L 2 號標準品 150µl 的3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
50 ng/L 1 號標準品 150µl 的2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl，
2
然后再加待測樣品 10 µl（樣品zui終稀釋度為 5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡
量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用。
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此
重復(fù)5 次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑 50µl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同 3。
8. 洗滌：操作同 5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑 A50µl，再加入顯色劑 B50µl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色
15分鐘。
10. 終止：每孔加終止液50µl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止
液后15 分鐘以內(nèi)進行。
大鼠腸促*肽（CCK）實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠腸促*肽（CCK） 水平。用純化的大鼠腸促
*肽（CCK） 抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入腸促*肽
（CCK） ，再與HRP 標記的腸促*肽（CCK） 抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)
過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)
化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的腸促*肽（CCK） 呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波
長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠腸促*肽（CCK） 濃度。
大鼠腸促*肽（CCK）試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（1600 ng/L ） 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5 ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑 B 液 6ml×1/ 瓶 12 密封袋 1 個
