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大鼠表皮生長因子(EGF)說明書

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大鼠表皮生長因子(EGF)實驗原理
本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠表皮生長因子(EGF) 水平。用純化的大鼠表
皮生長因子(EGF) 抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入表皮生長
因子(EGF) ,再與HRP 標記的表皮生長因子(EGF) 抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合
物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在HRP 酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作
用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的表皮生長因子(EGF) 呈正相關。用酶標儀在
450nm 波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品中大鼠表皮生長因子(EGF) 濃度。
大鼠表皮生長因子(EGF)試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml ×1 瓶
2 酶標試劑 6ml ×1 瓶 8 標準品(960pg/ml ) 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml ×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑A 液 6ml ×1 瓶 11 封板膜 2 張  
6 顯色劑B 液 6ml ×1/ 瓶 12 密封袋 1 個
大鼠表皮生長因子(EGF)標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因 NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP )活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
480pg/ml 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入 150μl 標準品稀釋液
240pg/ml 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
120pg/ml 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
60pg/ml 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
30pg/ml 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入 150μl 標準品稀釋液
2. 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,
然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30 分鐘。    
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此
重復5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50μl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50 μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11. 測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止
液后15分鐘以內進行。


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