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 本試劑盒只能用于科學(xué)研究，不得用于醫(yī)學(xué)診斷

大鼠（Rat）免疫球蛋白 EE（IgE）ELISA 檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被免疫球蛋白E（IgE）抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過(guò)溫育并*洗滌用底物TMB顯色，TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的免疫球蛋白E（IgE）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心分離。

2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清。

3.細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘去除顆粒和聚合物。

4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘取上清。

5.保存：如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項(xiàng)

1.試劑盒保存在 2-8℃，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會(huì)有結(jié)晶，這屬于正?，F(xiàn)象，水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

2.實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.濃度為 0 的 S0 號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品即可視為陰性對(duì)照或者空白；按照說(shuō)明書操作時(shí)樣本已經(jīng)稀釋 5 倍，zui終結(jié)果乘以 5 才是樣本實(shí)際濃度。

4.嚴(yán)格按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行溫育操作。

5.所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成名稱

96 孔配置

48 孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12 孔×8 條

12 孔×4 條

無(wú)

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL*6 管

0.3mL*6 管

無(wú)*6mL3mL

無(wú)檢測(cè)抗體-HRP

10mL

5mL

無(wú)

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說(shuō)明書進(jìn)行稀釋底物 A

6mL

3mL

無(wú)

底物 B

6mL

3mL

無(wú)終止液

6mL

3mL

無(wú)封板膜

2 張

2 張

無(wú)說(shuō)明書

1 份

1 份

無(wú)自封袋

1 個(gè)

1 個(gè)

無(wú)

注：標(biāo)準(zhǔn)品（S0-S5）濃度依次為：0、1.5、3、6、12、24μg/mL試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌緩沖液加 19 份的餾水。

洗板方法

1.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡

孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。

2.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

操作步驟

1.從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封

袋密封放回 4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品 50μL；

3.樣本孔先加待測(cè)樣本 10μL，再加* 40μL；空白孔不加。

4.

除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體 100L，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板 5 次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。

7.每孔加入終止液 50μL，15min 內(nèi)，在 450nm 波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD 值。

結(jié)果判斷繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線：在 Excel 工作表中，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD 值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸曲線，按曲線方程計(jì)算各本濃度值。

試劑盒性能

1.準(zhǔn)確性：標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值，大于等于0.9900。

2.靈敏度：zui低檢測(cè)濃度小于 0.1μg/mL。

3.特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。

5.貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.有效期：6 個(gè)月免責(zé)聲明

1.試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。

2.嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說(shuō)明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。