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　　*檢測試劑盒是用來檢測動物性食品中的*殘留物的。*檢測試劑盒分為兩種，一種是水產(chǎn)試劑盒，一種是普通畜禽制品檢測試劑盒。
　　
　　原理：
　　
　　本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，樣本中的殘留物AOZ經(jīng)衍生化后和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗*代謝物的衍生物抗體，加入酶標(biāo)二抗后，用他TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物AOZ的含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物*代謝物的殘留量。
　　
　　樣本前處理步驟
　　
　　注：樣本處理前須知
　　
　　處理任何樣本時，都必須注意：
　　
　?。╝）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
　　
　　（b）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。樣本前處理需配制：
　　
　　配液1：衍生化試劑15.1mg2-硝基苯甲醛
　　
　　加甲醇10ml溶解（濃度為10mM）。
　　
　　配液2：用去離子水將2×濃縮復(fù)溶液按1：1稀釋（1份濃縮復(fù)溶液+1份去離子水）用于抗體稀釋和樣本的復(fù)溶。
　　
　　配液3：0.1MK2HPO422.8gK2HPO4?3H2O
　　
　　加去離子水溶解定容至1L。
　　
　　配液4：1MHCl8.3ml濃HCl
　　
　　用去離子水定容至100ml。
　　
　　配液5：1MNaOH4gNaOH
　　
　　用去離子水溶解定容至100ml。
　　
　?。╝）水產(chǎn)樣本前處理
　　
　　┅┅用均質(zhì)器均質(zhì)樣本；
　　
　　┅┅取1±0.05g的均質(zhì)物（魚/蝦），分別加入4ml的蒸餾水，0.5ml1MHCL和100ml衍生化試劑，充分振蕩；
　　
　　┅┅在37oC過夜孵育（大約16h）；
　　
　　┅┅分別加入5ml0.1MK2HPO4，0.4ml1MNaOH和5ml乙酸乙酯，劇烈振蕩30s；
　　
　　┅┅在室溫下（20-25oC/68-77℉）3000g以上離心10min；
　　
　　┅┅取出2.5ml乙酸乙酯到另一個容器中50oC下氮?dú)獯蹈苫蛐D(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干；
　　
　　┅┅用1ml正己烷（或正庚烷）溶解干燥物，用1ml已稀釋好的復(fù)溶液充分混合；
　　
　　┅┅在室溫下（20-25oC/68-77℉）3000g以上離心10min；
　　
　　┅┅取50ml下層液體用于分析。
　　
　　樣本稀釋倍數(shù)：2
　　
　　注：樣本應(yīng)當(dāng)保存在陰涼避光處并且需要冷藏保存。
　　
　　酶標(biāo)免疫分析程序：
　　
　　測定前應(yīng)須知：
　　
　　1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。
　　
　　2、使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。
　　
　　3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。
　　
　　4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜蓋住微孔板。
　　
　　操作步驟：
　　
　　1、將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出，置室溫（20-25℃）平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
　　
　　2、配液：將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水稀釋至800ml備用（或按需量稀釋），稀釋好的洗滌液在4℃
　　
　　環(huán)境可保存一個月，使用前也需回溫。
　　
　　3、取出板架及需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔板重新密封，保存于2-8℃不要冷凍。
　　
　　4、編號：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品均需做2孔。
　　
　　5、將濃縮抗體用已稀釋好的復(fù)溶液11倍稀釋（1份抗體加入10份稀釋液）。
　　
　　6、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50μl/孔，然后加已稀釋好的抗體50μl/孔，用蓋板膜蓋板，25℃環(huán)境中反應(yīng)60min，取出用洗滌液每孔加250ml，洗板5次，每次10秒，拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
　　
　　7、加酶標(biāo)二抗：每孔加入100ml，用蓋板膜蓋板后置25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。取出用洗滌液每孔加250ml，洗板5次，每次10秒，拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
　　
　　8、顯色：每孔加入顯色劑A液50ml，再加B液50ml，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中避光顯色30min。
　　
　　9、測定：每孔加入終止液50ml，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。
　　
　　結(jié)果判定
　　
　　結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與AOZ的含量成負(fù)相關(guān)。
　　
　　1、用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍（µg/L）。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.310，樣本2的吸光度值為0.820，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是：0ppb為1.810；0.025ppb為1.520；0.075ppb為1.230；0.225ppb為0.760；0.675ppb為0.389；2.025ppb為0.118。則樣本1的濃度范圍是0.675ppb-2.025ppb，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)；樣本2的濃度范圍是0.075ppb-0.225ppb，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
　　
　　2、定量分析
　　
　?。?）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以*個標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即百分吸光度值（%）=B×100%
　　
　　B0B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
　　
　　B0—0µg/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
　　
　?。?）標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
　　
　　以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以*代謝物標(biāo)準(zhǔn)品濃度（µg/L）的半對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中AOZ實(shí)際濃度。