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技術文章
犬鉤端螺旋體試劑盒說明書
點擊次數(shù)：849 發(fā)布時間：2012-12-11
犬鉤端螺旋體試劑盒*，96T包裝?？蒲惺褂?。
原理
原理
采用定量夾心酶聯(lián)免疫技術?？贵w具體為FGF6已經被預先涂到微孔板。標準和樣品吸入井和任何FGF6目前被綁定的固定化抗體。*共軛的抗體特異性FGF6除去任何未結合的物質后，加入到孔中?？?蛋白共軛的辣根過氧化物酶（HRP）的洗滌后，加入到孔中。經過洗滌，以除去任何未結合的抗*蛋白的酶試劑，底物溶液加入到孔中，顯色成比例的量的初始步驟中的約束的FGF6。彩色顯影被停止并測量的顏色的強度
檢測程序：
在使用前，將所有試劑和樣品室溫。再次離心樣品解凍后測定前。據(jù)建議，所有樣品和標準來測定一式兩份。
1。準備好所有試劑，工作標準和樣品在前面的章節(jié)中。
2。請確定井數(shù)的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥劑，密封保鮮袋，將未使用的井在4°C的含量布局表
。每孔加入100μl的標準和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時，在37℃下一盤布局記錄標準和樣品檢測。
4。每孔中取出的液體，不洗。
5。向每孔中加入100μl*抗體（1倍）。蓋上一個新的膠粘帶。為1小時孵育在37℃下（*抗體（1X）可能會出現(xiàn)混濁。預熱至室溫，輕輕混勻，直到出現(xiàn)均勻解決方案。）
6。吸液的各孔和洗滌，共洗滌三次重復該過程兩次。洗凈，每孔填充洗滌緩沖液（200μL）使用噴瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，靜置2分鐘，*清除液體的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗滌后，清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對干凈的紙巾。
7。向每孔中加入100μl的HRP-抗*蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一個新的粘接劑條。溫育1小時，在37℃下
8。重復的愿望/洗滌過??程中，在步驟6的5倍。
9。將90μlTMB底物添加到每個孔中。孵育15-30分鐘，在37℃下避光
10。一站式解決方案，每孔加入底物，輕輕晃動酶標板，以確保充分混合。
11。在5分鐘內，設置至450nm，使用酶標儀測定各孔的光密度。如果波長校正，設置為540nm或570nm處。在540nm或570nm波長在450nm處的讀數(shù)減去讀數(shù)。該減法校正板的光學缺陷。在450nm處未經修正讀數(shù)直接，可能會比較高，不太準確。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
檢測程序：
在使用前，將所有試劑和樣品室溫。再次離心樣品解凍后測定前。據(jù)建議，所有樣品和標準來測定一式兩份。
1。準備好所有試劑，工作標準和樣品在前面的章節(jié)中。
2。請確定井數(shù)的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥劑，密封保鮮袋，將未使用的井在4°C的含量布局表
。每孔加入100μl的標準和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時，在37℃下一盤布局記錄標準和樣品檢測。
4。每孔中取出的液體，不洗。
5。向每孔中加入100μl*抗體（1倍）。蓋上一個新的膠粘帶。為1小時孵育在37℃下（*抗體（1X）可能會出現(xiàn)混濁。預熱至室溫，輕輕混勻，直到出現(xiàn)均勻解決方案。）
6。吸液的各孔和洗滌，共洗滌三次重復該過程兩次。洗凈，每孔填充洗滌緩沖液（200μL）使用噴瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，靜置2分鐘，*清除液體的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗滌后，清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對干凈的紙巾。
7。向每孔中加入100μl的HRP-抗*蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一個新的粘接劑條。溫育1小時，在37℃下
8。重復的愿望/洗滌過??程中，在步驟6的5倍。
9。將90μlTMB底物添加到每個孔中。孵育15-30分鐘，在37℃下避光
10。一站式解決方案，每孔加入底物，輕輕晃動酶標板，以確保充分混合。
11。在5分鐘內，設置至450nm，使用酶標儀測定各孔的光密度。如果波長校正，設置為540nm或570nm處。在540nm或570nm波長在450nm處的讀數(shù)減去讀數(shù)。該減法校正板的光學缺陷。在450nm處未經修正讀數(shù)直接，可能會比較高，不太準確。
操作步驟
1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
| 800pmol/L | 5號標準品 | 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 400pmol/L | 4號標準品 | 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 200pmol/L | 3號標準品 | 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 100pmol/L | 2號標準品 | 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
| 50pmol/L | 1號標準品 | 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液 |
2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11. 測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
計算結果：
建議使用專業(yè)的軟“曲線專家1.3”的標準曲線，這可以從我們的下載。
平均每個標準和樣品的重復讀數(shù)和平均減去零標準的光學密度。
標準曲線，通過減少使用能產生四參數(shù)邏輯（4-PL）的曲線擬合的計算機軟件的數(shù)據(jù)。作為一種替代方法，建立標準曲線，對在y-軸的濃度通過繪制在x-軸為每個標準的平均吸光度，并繪制一個通過在曲線圖上的點的*擬合曲線。該數(shù)據(jù)可以通過繪制的FGF6濃度與日志的OD值和*擬合直線的日志，可以通過回歸分析確定線性化。此過程會產生足夠的，但不太的適合的數(shù)據(jù)。
如果已稀釋的樣品，從標準曲線上讀出的濃度必須乘以稀釋因子。