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可溶性粘附分子檢測
點擊次數(shù)：436 發(fā)布時間：2012-11-1
目前對于血清中可溶性粘附分子的檢測多采用ELISA試劑盒，5種可溶性粘附分子在正常人血漿中濃度的變化范圍及某些疾病狀態(tài)下的變化。不同來源的試劑盒由采用抗體特異性和親和力的差別、以及標準品不同，所得出的正常值范圍有較大差異，因此有必要對這種檢測手段加以標準化。值得注意的采用這種方法檢測得到的濃度值未必能夠準確反映可溶性粘附分子的實際水平，因為可溶性粘附分子除以游離狀態(tài)存在外，還可以與細胞表面游離的配體結(jié)合，用常規(guī)的ELISA法無法檢測結(jié)合狀態(tài)的可溶性粘附分子。此外，對所測得的可溶性粘附分子水平應(yīng)從粘附分子產(chǎn)生和清除兩方面進行分析，產(chǎn)生的增加和清除的減少都可造成可溶性粘附分子血中水平的升高，是兩個不同原因所導(dǎo)致的相同結(jié)果。
可溶性粘附分子elisa試劑盒，種屬齊全，檢測程序為：
在使用前，將所有試劑和樣品室溫。再次離心樣品解凍后測定前。據(jù)建議，所有樣品和標準來測定一式兩份。
1。準備好所有試劑，工作標準和樣品在前面的章節(jié)中。
2。請確定井數(shù)的使用，并把任何剩余的井和入袋干燥劑，密封保鮮袋，將未使用的井在4°C的含量布局表
。每孔加入100μl的標準和樣品。封面用膠粘帶提供。孵育2小時，在37℃下一盤布局記錄標準和樣品檢測。
4。每孔中取出的液體，不洗。
5。向每孔中加入100μl*抗體（1倍）。蓋上一個新的膠粘帶。孵育1小時，在37℃下（*抗體（1X）可能會出現(xiàn)混濁。預(yù)熱至室溫，輕輕混勻，直到出現(xiàn)均勻解決方案。）
6。吸液的各孔和洗滌，共洗滌三次重復(fù)該過程兩次。洗凈，每孔填充洗滌緩沖液（200μL）使用噴瓶，多道移液器，歧管器，或autowasher，和，靜置2分鐘，*清除液體的每一步是*的良好的性能。zui后一次洗滌后，清除任何剩余洗滌緩沖液的吸ordecanting。倒置板和涂抹對干凈的紙巾。
7。向每孔中加入100μl的HRP-抗*蛋白（1×）。量的微量滴定板，用一個新的粘接劑條。溫育1小時，在37℃下
8。重復(fù)的愿望/洗滌過??程中，在步驟6的5倍。
9。將90μlTMB底物添加到每個孔中。孵育15-30分鐘，在37℃下避光
10。一站式解決方案，每孔加入底物，輕輕晃動酶標板，以確保充分混合。
11。在5分鐘內(nèi)，設(shè)置至450nm，使用酶標儀測定各孔的光密度。如果波長校正，設(shè)置為540nm或570nm處。在540nm或570nm波長在450nm處的讀數(shù)減去讀數(shù)。該減法校正板的光學(xué)缺陷。在450nm處未經(jīng)修正讀數(shù)直接，可能會比較高，不太準確。